Diferencia entre ELISA directo e indirecto

Diferencia clave - ELISA directo vs indirecto

Un inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA), también conocido como inmunoensayo enzimático, es una prueba serológica que detecta anticuerpos en la sangre. Se utiliza como herramienta de diagnóstico para determinar si el paciente ha estado expuesto a un tipo particular de virus u otro agente infeccioso (antígeno) y si el cuerpo ha producido anticuerpos contra la infección. ELISA también puede identificar las infecciones pasadas y actuales. Por lo tanto, el ELISA se usa a menudo como una prueba de preselección por parte de los médicos antes de un análisis profundo de las enfermedades. Esta prueba se puede realizar en el laboratorio tomando una muestra de sangre del paciente. Hay dos tipos de prueba ELISA: ELISA directo y ELISA indirecto. La diferencia clave entre ELISA directo e indirecto es que El ELISA indirecto es más sensible y requiere la adición de un anticuerpo secundario mientras ELISA directo Es menos sensible y solo usa un anticuerpo primario..

CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es ELISA directo?
3. Qué es ELISA indirecto
4. Comparación lado a lado - ELISA directo frente a indirecto
5. Resumen

¿Qué es ELISA directo??

ELISA es una prueba diagnóstica de la enfermedad realizada para identificar la presencia de antígenos o anticuerpos particulares en la sangre. Se realiza como un ensayo de placa. Utiliza anticuerpos ligados con enzimas fácilmente ensayadas. La presencia de antígenos en la muestra de suero se une con anticuerpos específicos vinculados con enzimas. En el paso final, se agrega un sustrato específico para reaccionar con la enzima. La enzima convierte el sustrato en un producto coloreado o que produce señales. El cambio de color en el sustrato químico revela la presencia de un anticuerpo particular en la muestra de suero. La prueba ELISA directa utiliza solo un anticuerpo primario vinculado a la enzima. Al unirse al antígeno, cambia rápidamente el color, lo que indica la presencia del agente infeccioso en la sangre. Sin embargo, la intensidad de las señales es más débil en el ELISA directo, ya que los epítopos están limitados a la unión de los antígenos. Por lo tanto, el ELISA directo es menos sensible en comparación con el ELISA indirecto.

Figura 01: Prueba directa de ELISA

Qué es ELISA indirecto?

ELISA se puede realizar utilizando dos tipos de anticuerpos a saber; Anticuerpo primario y anticuerpo secundario. La herramienta ELISA indirecta utiliza ambos tipos de anticuerpos para amplificar las señales para una mejor detección. La técnica de ELISA indirecta se realiza de la siguiente manera.

Las placas se incuban con antígenos y se lavan para bloquear la unión no específica..
Luego se añaden los anticuerpos primarios y se lavan..
Se añaden los anticuerpos secundarios ligados a enzimas y se lavan..
Se añade un sustrato y se deja reaccionar con las enzimas..
Se detectan las señales y se identifica la presencia o ausencia del antígeno específico en la muestra..

En la prueba ELISA indirecta, varios anticuerpos secundarios pueden unirse a un único anticuerpo primario. Los anticuerpos secundarios están vinculados con enzimas fácilmente ensayadas. Por lo tanto, un enlace puede hacer una señal fuerte debido a más de una interacción. Por lo tanto, el ELISA indirecto es más sensible que el ELISA directo. Sin embargo, el ELISA indirecto puede producir señales no específicas debido a reacciones cruzadas de los anticuerpos secundarios.

Figura 02: Prueba ELISA indirecta

¿Cuál es la diferencia entre ELISA directo e indirecto??

ELISA directo vs indirecto
El ELISA directo es menos sensible en comparación con el ELISA indirecto.	ELISA indirecto es más sensible.
Tiempo tomado
La prueba ELISA directa es un proceso rápido.	El ELISA indirecto requiere mucho tiempo.
Uso de anticuerpos
Solo un tipo de anticuerpos (anticuerpos primarios) se utilizan en ELISA directo.	Los anticuerpos primarios y secundarios se utilizan para ELISA indirecto..
Enlace con enzimas
Los anticuerpos primarios están relacionados con las enzimas..	Los anticuerpos secundarios están relacionados con las enzimas..
Reactividad cruzada de segundos anticuerpos
El ELISA directo elimina la reactividad cruzada de los segundos anticuerpos.	El ELISA indirecto se ve afectado con reactividad cruzada de segundos anticuerpos.
Señales
Las señales son débiles en comparación con el ELISA indirecto.	Las señales se amplifican en ELISA indirecto. Por lo tanto, es fácil de detectar..

Resumen - ELISA directo vs indirecto

ELISA es una técnica bioquímica utilizada principalmente en inmunología para detectar la presencia de un anticuerpo o un antígeno en una muestra de sangre de un paciente. Se puede realizar a través de dos procesos conocidos como ELISA directo o indirecto. La prueba ELISA directa usa solo anticuerpos primarios para detectar el antígeno, mientras que la prueba ELISA indirecta usa anticuerpos primarios y secundarios. En el ELISA directo, los anticuerpos primarios se marcan, mientras que en el ELISA indirecto se marcan los anticuerpos secundarios. Esta es la diferencia entre ELISA directo e indirecto..

Referencias
1. "El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)". Boletín de la Organización Mundial de la Salud. Biblioteca Nacional de Medicina de los Estados Unidos, 1976. Web. 29 de marzo de 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen y J. Van Der Veen. "Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas que utiliza antígenos marcados para la detección de inmunoglobulina M y A anticuerpos en la toxoplasmosis: comparación con inmunofluorescencia indirecta y ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de doble sándwich". Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU., Junio de 1983. Web. 29 de marzo de 2017

Imagen de cortesía:
1. “Diagrama ELISA” Por Cavitri - Trabajo propio (CC BY 3.0) vía Commons Wikimedia
2. “ELISA indirecto” por Cawang - Trabajo propio (CC0) a través de Commons Wikimedia

Biología Molecular