Diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta

los diferencia clave entre la inmunofluorescencia directa e indirecta es que la La inmunofluorescencia directa utiliza un único anticuerpo que actúa contra el objetivo de interés, mientras que la inmunofluorescencia indirecta utiliza dos anticuerpos para marcar el objetivo de interés..

La inmunofluorescencia o imágenes de células es una técnica que se utiliza para marcar un antígeno diana específico con un fluoróforo. Aquí, el fluoróforo es un compuesto químico fluorescente que puede reemitir la luz tras la excitación de la luz. Cuando un fluoróforo se une con el antígeno objetivo, permite la detección de la molécula objetivo en la muestra. Para describirlo mejor, cuando un antígeno se une con un anticuerpo específico, puede conjugarse con fluoróforos. Por lo tanto, es fácil detectar la presencia del antígeno objetivo en la muestra cuando se observa bajo el microscopio de fluorescencia.

Además, hay dos tipos de inmunofluorescencia; Inmunofluorescencia directa e indirecta. La diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta radica principalmente en el número de anticuerpos utilizados y la conjugación con fluoróforo. Es decir, en la inmunofluorescencia directa, el fluoróforo se conjuga directamente con el anticuerpo primario, mientras que en la inmunofluorescencia indirecta, el conjugado fluoróforo con el anticuerpo secundario.

CONTENIDO

1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es la inmunofluorescencia directa?
3. ¿Qué es la inmunofluorescencia indirecta?
4. Similitudes entre la inmunofluorescencia directa e indirecta
5. Comparación lado a lado: inmunofluorescencia directa e indirecta en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la inmunofluorescencia directa??

La inmunofluorescencia utiliza anticuerpos para detectar antígenos diana específicos. La inmunofluorescencia directa es uno de los dos tipos de inmunofluorescencia. En la inmunofluorescencia directa, un solo anticuerpo (anticuerpo primario) interviene y el fluoróforo se conjuga directamente con el anticuerpo primario. Al unirse el anticuerpo con el antígeno diana, el fluoróforo emite una fluorescencia que puede detectarse con un microscopio de fluorescencia.

Figura 01: Inmunofluorescencia directa

Sin embargo, la inmunofluorescencia directa es un método costoso ya que los anticuerpos conjugados primarios son costosos en comparación con los anticuerpos secundarios. Sin embargo, no implica un paso adicional por lo tanto, una técnica más corta. Además, los enlaces no específicos se reducen en la inmunofluorescencia directa. Por lo tanto, la reactividad cruzada de las especies es baja. Pero en la detección, la sensibilidad de la inmunofluorescencia directa es débil en comparación con la inmunofluorescencia indirecta .

¿Qué es la inmunofluorescencia indirecta??

La inmunofluorescencia indirecta es el segundo tipo de inmunofluorescencia que implica dos tipos de anticuerpos, como los anticuerpos primarios y secundarios, en el etiquetado del antígeno diana. En este método, el fluoróforo se conjuga con el anticuerpo secundario. Por lo tanto, esta técnica implica un paso adicional..

Figura 02: Inmunofluorescencia

Sin embargo, la sensibilidad en este método es alta, ya que varios fluoróforos pueden conjugarse con anticuerpos secundarios y facilita la detección. Además, la inmunofluorescencia indirecta es menos costosa debido al hecho de que la conjugación de anticuerpos secundarios es menos costosa y más fácil. En comparación con la inmunofluorescencia directa, la reactividad cruzada de las especies es alta en el método indirecto.

¿Cuáles son las similitudes entre la inmunofluorescencia directa e indirecta??

• Son dos tipos de técnicas de inmunofluorescencia..
• Los anticuerpos primarios y el fluoróforo implican en ambos métodos..
• Además, la reacción antígeno-anticuerpo se produce en ambos métodos..
• Además, tanto la inmunofluorescencia directa como la indirecta utilizan un microscopio de fluorescencia para la detección de antígenos..

¿Cuál es la diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta??

La inmunofluorescencia puede ser directa o indirecta en función de la conjugación del fluoróforo con los anticuerpos utilizados. En la inmunofluorescencia directa, los fluoróforos se conjugan con el anticuerpo primario, que es el único anticuerpo que interviene en esta técnica. En contraste con eso, en la inmunofluorescencia indirecta, los fluoróforos se conjugan con el anticuerpo secundario, que es uno de los dos tipos de anticuerpos que intervienen en la técnica. Por lo tanto, la principal diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta es el tipo de anticuerpo que se conjuga con el fluoróforo..

La siguiente infografía proporciona una comparación lado a lado de la diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta.

Resumen - Inmunofluorescencia directa vs indirecta

La inmunofluorescencia es una técnica que se utiliza para detectar la presencia de antígenos específicos en una muestra. Esta técnica utiliza anticuerpos específicos. Por lo tanto, en esto, los anticuerpos se conjugan con fluoróforos para detectarlos usando un microscopio fluorescente. Además, hay dos tipos de inmunofluorescencia, a saber, la inmunofluorescencia directa e indirecta. La inmunofluorescencia directa implica un único anticuerpo y un fluoróforo directamente conjugado con este anticuerpo. La inmunofluorescencia indirecta implica dos anticuerpos; Primario y secundario y fluoróforo conjugado con el anticuerpo secundario. Dado que varios anticuerpos secundarios pueden unirse con un anticuerpo primario y varios fluoróforos pueden conjugarse con anticuerpos secundarios, la inmunofluorescencia indirecta es un método más sensible que el método directo. Además, el método indirecto es menos costoso que el método directo. Así, esta es la diferencia entre inmunofluorescencia directa e indirecta..

Referencia:

1. “Inmunofluorescencia”. Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19 de agosto de 2018. Disponible aquí 

Imagen de cortesía:

1. "HSP IF IgA" Por Emmanuelm en es.wikipedia, (CC BY 3.0) vía Commons Wikimedia
2. "Inmunofluorescencia" Por Westhayl618 - Trabajo propio, (CC BY-SA 4.0) vía Commons Wikimedia