¿Por qué se utiliza el calor en la tinción de endosporas?

Se utiliza un proceso de tinción diferencial en la tinción de endosporas. El verde de malaquita es la mancha primaria que tiñe las células vegetativas y las endosporas dentro de la muestra. Luego, el uso de calor ayuda a penetrar la mancha primaria en la endospora. Después de la decoloración, se utiliza la safranina de contratinción para teñir el fondo.. 

Dos géneros patógenos conocidos como Bacilo y Clostridium Producir endosporas metabólicamente inactivas para resistir condiciones ambientales adversas. Dado que las endosporas causan varias enfermedades letales, su identificación es bastante importante en muestras clínicas.

Áreas clave cubiertas

1. Que son las endosporas
    - Definición, Hechos
2. ¿Qué es la tinción con endosporas?
    - Técnicas De Tinción De Endosporas
3. ¿Por qué se utiliza el calor en la tinción de endosporas?
     - Uso del calor

Términos clave: Endosporas, calor, verde de malaquita, poros, células vegetativas

Que son las endosporas

Una endospora es una estructura resistente producida por algunos géneros bacterianos patógenos, como Bacilo y Clostridium Para sobrevivir en condiciones ambientales desfavorables. Estas condiciones desfavorables pueden ser calor, desecación, radiación o productos químicos. El proceso de producción de endosporas a partir de células vegetativas se llama esporulación. Puede tomar de 8 a 10 horas completar el proceso. Las endosporas pueden residir dentro de la célula bacteriana o pueden existir como esporas libres. La formación de endosporas se muestra en Figura 1.

Figura 1: Formación de endosporas

Las endosporas son metabólicamente inactivas o inactivas. Contienen una pequeña cantidad de citoplasma y ADN cubiertos por una cubierta exterior protectora. La pared celular consiste en ácido dipicolínico, que le confiere propiedades de resistencia al calor a la endospora. Las endosporas germinan para producir nuevos organismos cuando las condiciones ambientales se vuelven favorables. El tratamiento del calor húmedo a 121 ° C durante 15 minutos puede destruir las endosporas bacterianas. 

¿Qué es la tinción con endosporas?

La tinción con endosporas es un proceso diferencial de tinción en el que diferentes estructuras de la muestra se tiñen en diferentes colores. Permite la identificación de endosporas a partir de células vegetativas. El proceso estándar de tinción de endosporas es la técnica de Schaeffer-Dulton. La mancha primaria en esta técnica es la malaquita verde, y la contratinción es safranina..

Técnica Schaeffer-Dulton - Procedimiento

1. Después de untar en un portaobjetos de microscopio, permita que la muestra bacteriana se sature con la solución de verde de malaquita..
2. Luego, caliente suavemente el portaobjetos durante 3-5 minutos hasta que el colorante comience a evaporarse..
3. Deje enfriar el portaobjetos y lávelo con agua para decolorarlo..
4. Finalmente, después de contrarrestar, enjuague la diapositiva..
5. Seque al aire el portaobjetos y obsérvelo bajo un microscopio..

Aquí, las endosporas se tiñen de verde con malaquita verde y las células vegetativas se tiñen de color rosa con safranina. Las endosporas teñidas por la técnica de Schaeffer-Dulton se muestran en Figura 2.

Figura 2: Endosporas (verdes) y Células Vgetativas (rosa)

Una técnica alternativa de tinción de endosporas puede identificarse conocida como método de Doner. Las endosporas se teñirán de rojo en este método.

¿Por qué se utiliza el calor en la tinción de endosporas?

La cubierta de queratina de las endosporas resiste la tinción. Por lo tanto, la mancha primaria debe ser forzada en la endospora. El uso del calor es mejorar la penetración de la mancha primaria en la endospora. El tobogán con verde de malaquita puede calentarse hasta 3-5 minutos. El tiempo de calentamiento es directamente proporcional a las cantidades de colorantes que penetran en la pared de las endosporas. Los tiempos de calentamiento más prolongados hacen que los poros en la pared de la endospora faciliten la penetración de más tintes.  

Conclusión

Las endosporas son las células reproductivas de la mayoría de las bacterias patógenas. Por lo tanto, la identificación de endosporas en una muestra es crítica en el diagnóstico..

Referencia:

1. “Tinción de endosporas: comprensión de definiciones, técnicas y procedimientos”. Microscopio máster, Disponible aquí.

Imagen de cortesía:

1. “Formación de endosporas” por Farah, Sophia, Alex - Trabajo propio (CC BY-SA 4.0) a través de Commons Wikimedia
2. “Bacillus subtilis Spore” por Y tambe (cargador original) - Trabajo propio (CC BY-SA 3.0) a través de Commons Wikimedia