Diferencia entre GFP y EGFP
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los diferencia principal entre GFP y EGFP es que la GFP (significa Green Fluorescent Protein) es una proteína que muestra una fluorescencia verde brillante cuando se expone a la luz azul, mientras que la EGFP (significa Green Fluorescence Protein) muestra una fluorescencia más fuerte que la de GFP. Además, otra diferencia importante entre GFP y EGFP es que la GFP es una proteína de tipo salvaje aislada de la medusa., Aequorea victoria. Pero, EGFP es una variante diseñada del tipo salvaje original.
GFP y EGFP son dos tipos de proteínas que sirven como cromóforos internos. No requieren enzimas / sustratos accesorios, cofactor o productos genéticos para exhibir su color. Por lo tanto, ambos se utilizan como un reportero de la expresión génica en biología molecular.
Áreas clave cubiertas
1. Que es GFP
- Definición, Estructura, Importancia
2. ¿Qué es EGFP?
- Definición, Estructura, Importancia
3. ¿Cuáles son las similitudes entre GFP y EGFP?
- Esquema de características comunes
4. ¿Cuál es la diferencia entre GFP y EGFP?
- Comparación de diferencias clave
Términos clave
Cromóforo, EGFP, GFP, Fluorescencia verde, Proteína de tipo salvaje
Que es GFP
La GFP (proteína verde fluorescente) es una proteína que se ilumina en verde con luz azul o UV. Se produce naturalmente en la medusa., Aequorea Victoria. GFP se compone de 238 aminoácidos. El tamaño de GFP es de 26.9 kDa. GFP es una herramienta poderosa en biología molecular debido a su fluorescencia intrínseca sin ninguna molécula accesoria. La fluorescencia se debe a la reorganización covalente de los aminoácidos contiguos de la proteína. Después del plegamiento de la proteína, los átomos de la cadena principal, Ser65, Tyr66 y Gly67 forman el plano altamente conjugado. pag-cromóforo hidroxibencilideneimidazolinona en presencia de O2. Los estudios de estructura cristalina revelan que el empaquetamiento del cromóforo dentro del núcleo de la estructura del barril β de la molécula lo protege de la extinción a través de oxígeno paramagnético, dipolos de agua o isomerización cis-trans. Además, las interacciones no covalentes del cromóforo con las moléculas vecinas mejoran sus propiedades espectrales.
Figura 1: Representación de la cinta de GFP y fluoróforo
GFP se puede introducir en un organismo durante las modificaciones transgénicas. También se puede mantener a través de generaciones. El principal inconveniente de la GFP de tipo salvaje es la reducción de la eficacia de la proteína en las imágenes celulares causada por el plegamiento de baja eficiencia a temperaturas fisiológicas como 37 ° C, disminuyendo la señal fluorescente. Además, la tasa de maduración de GFP dentro de la célula huésped es lenta y tiende a acumularse. Se pueden observar dos picos de excitación debido a la presencia de dos formas diferentes del cromóforo. Sin embargo, la ingeniería de proteínas ha resuelto la mayoría de los problemas mediante la introducción de formas variantes de GFP de tipo salvaje.
¿Qué es EGFP?
EGFP (proteína de fluorescencia verde mejorada) es una variante de la GFP de tipo salvaje con una emisión de mayor intensidad con respecto a la GFP. Es una de las primeras y más importantes variantes de GFP. Las dos mutaciones, F64L y S65T, generan EGFP con una mayor eficiencia de plegado a 37 ° C. Curiosamente, EGFP tiene un solo pico de excitación a ~ 490 nm debido a la supresión del pico de 395 nm por S65T ya que modula el estado ionizado de Glu222 en las cercanías. Por otro lado, F64L aumenta la eficiencia de plegado a 37 ° C. Es importante destacar que la secuencia de codones de EGFP está optimizada para la expresión en las células de mamíferos.
Figura 2: Expresión de EGFP
Similitudes entre GFP y EGFP
- GFP y EGFP son proteínas que muestran una fluorescencia verde brillante cuando se exponen a la luz azul.
- Ambos pueden servir como cromóforos internos sin enzimas / sustratos accesorios, cofactor o productos genéticos para exhibir su color..
- Forman un pliegue clásico de β-barril con el cromóforo, que contiene una hélice que atraviesa el núcleo de la estructura..
- Se utilizan como reportero de expresión en biología molecular..
Diferencia entre GFP y EGFP
Definición
GFP: Una proteína de tipo salvaje que muestra fluorescencia verde bajo luz azul o UV y se produce naturalmente en las medusas., Aequorea Victoria
EGFP: Una variante de la GFP de tipo salvaje con emisión de mayor intensidad con respecto a la GFP
Representa
GFP: Proteína de fluorescencia verde
EGFP: Proteína de fluorescencia verde mejorada
Origen
GFP: Tipo salvaje
EGFP: Mutante
64th Aminoácidos
GFP: Fenilalanina
EGFP: Leucina
sesenta y cincoth Aminoácidos
GFP: Serina
EGFP: Treonina
Brillo del color
GFP: Verde brillante
EGFP: Verde más brillante
Picos de excitación
GFP: Dos picos (395 nm y 490 nm)
EGFP: Pico único (490 nm)
Eficiencia de plegado a 37 ° C
GFP: Bajo
EGFP: Alto
Conclusión
GFP es la proteína de tipo salvaje que muestra una fluorescencia verde brillante cuando se expone a la luz azul o UV. EGFP es una variante de GFP que muestra una fluorescencia de mayor intensidad en comparación con GFP. Por lo tanto, la principal diferencia entre GFP y EGFP es la intensidad de la fluorescencia verde que emite cada proteína..
Referencia:
1. Arpino, James A. J., et al. "La estructura cristalina de la proteína fluorescente verde mejorada a resolución de 1,35 Å revela conformaciones alternativas para Glu222". PLOS Medicina, Public Library of Science, journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.
Imagen de cortesía:
1. "Gfp y fluoróforo" Por Raymond Keller (Raymond Keller (charla)), bajo los auspicios de Crystal Protein. - Trabajo propio (Dominio Público) a través de Commons Wikimedia.
2. "Fgams ppat egfp puncta" Por Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, et al. (2013) Las enzimas biosintéticas de purina transfectadas transitoriamente forman cuerpos de estrés. PLoS ONE 8 (2): e56203. doi: 10.1371 / journal.pone.0056203 (CC BY 3.0) a través de Commons Wikimedia
