Diferencia entre la página de SDS y Western Blot

Diferencia clave - Página SDS vs Western Blot
 

La transferencia de Western es una técnica que detecta una proteína específica de una muestra de proteína. Esta técnica se realiza a través de varios pasos clave: electroforesis en gel, transferencia e hibridación. Electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS Page) es un tipo de técnica de electroforesis en gel que se utiliza para separar proteínas según sus tamaños (pesos moleculares). Western blot es una hoja especial de una membrana de transferencia que se utiliza para transferir el mismo patrón de proteínas en la página SDS. La diferencia clave entre SDS Page y Western Blot es que La página SDS permite la separación de proteínas en una mezcla. mientras Western Blot permite la detección y cuantificación de una proteína específica de una mezcla. Ambos son útiles en estudios de análisis de proteínas..

CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es la página de SDS?
3. ¿Qué es Western Blot?
4. Comparación lado a lado - SDS Page vs Western Blot
5. Resumen

¿Qué es la página de SDS??

SDS Page es una técnica de electroforesis en gel utilizada para la separación de proteínas. Se usa comúnmente en bioquímica, genética, medicina forense y biología molecular. Una vez que las proteínas se extraen de la muestra, se ejecutan en un gel compuesto de SDS y poliacrilamida. SDS es un detergente aniónico que se utiliza para linealizar proteínas (desnaturalizar proteínas) y para impartir una carga negativa a proteínas linealizadas proporcionales a su masa molecular. La poliacrilamida se convierte en el soporte sólido para el gel. Las proteínas desnaturalizadas que tienen carga negativa migran hacia el extremo positivo del aparato a través del gel. De acuerdo con los tamaños de las proteínas, las velocidades de migración difieren entre las proteínas y se produce la separación. Por lo tanto, la página SDS es útil para la separación de proteínas individuales en función de sus tamaños..

La preparación del gel de poliacrilamida para el fraccionamiento de proteínas es un paso crucial en la página de SDS. La concentración correcta de poliacrilamida y el tipo de agente de reticulación utilizado afectan en gran medida las propiedades físicas del gel, lo que hace que la separación real de las diferentes proteínas. Los tamaños de los poros del gel deben manejarse adecuadamente para una separación efectiva. Sin embargo, SDS Page es considerada como una técnica de separación de proteínas de alta resolución..

La técnica de SDS Page tiene una limitación importante en el análisis de proteínas. Dado que SDS desnaturaliza las proteínas antes de la separación, no permite la detección de actividad enzimática, interacciones de unión a proteínas, cofactores de proteínas, etc..

Figura 01: Página SDS

¿Qué es Western Blot??

La técnica de transferencia Western permite la detección de una proteína específica de una mezcla de proteínas y la medición de la cantidad y el peso molecular de la proteína. Western blot es la membrana utilizada durante el procedimiento de transferencia para obtener la imagen de espejo de los patrones de proteínas en el gel de poliacrilamida SDS. La membrana que se utiliza para la transferencia de Western está compuesta principalmente por nitrocelulosa o difluoruro de polivinilideno (PVDF). La membrana con la proteína transferida se puede utilizar para identificar la proteína deseada. Requiere un anticuerpo de alta calidad para la detección de la proteína deseada mediante hibridación. El anticuerpo se une a su antígeno específico y revela la presencia del antígeno deseado, que es una proteína..

La transferencia de las proteínas del gel de poliacrilamida SDS a la transferencia Western se realiza mediante electrotransferencia. Es un método eficaz y rápido que hace que las proteínas salgan del gel por electroforesis y pasen a la membrana de nitrocelulosa (Western Blot)..

Figura 02: Western Blot

¿Cuál es la diferencia entre SDS Page y Western Blot??

Página SDS vs Western Blot
SDS Page es una técnica de electroforesis en gel..	Western blot es una técnica que se realiza en una membrana para detectar una proteína específica de una mezcla.
Utilizar
La página SDS permite la separación de proteínas según sus tamaños..	Western blot permite la transferencia de proteínas en el gel de la página SDS sin cambiar su patrón y permite la hibridación con anticuerpos específicos.
Desventajas
La desnaturalización de las proteínas, el alto costo y la presencia de neurotoxinas son los inconvenientes de esta técnica..	Esta técnica requiere mucho tiempo y requiere una buena experiencia personal y condiciones controladas específicas.

Resumen - SDS Page vs Western Blot

La página SDS y la transferencia Western son dos métodos involucrados en el análisis de proteínas. La página SDS permite una fácil separación de proteínas en un gel de acuerdo con su peso molecular. Western blot ayuda a confirmar la presencia y la cantidad de una proteína específica mediante la hibridación con anticuerpos específicos. Esta es la diferencia entre SDS Page y western blot.

Referencias:
1. Blancher, C., y A. Jones. “SDS-PAGE y Western Blotting Techniques”. Métodos en medicina molecular. Biblioteca Nacional de Medicina de los Estados Unidos, n.d. Web. 27 de marzo de 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig y David H. Petering. “SDS-PAGE nativa: Separación electroforética de alta resolución de proteínas con retención de propiedades nativas que incluyen iones metálicos unidos”. Metalómica: ciencia biometal integrada. Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU., Mayo de 2014. Web. 27 de marzo de 2017.

Imagen de cortesía:
1. “Electroforesis SDS-PAGE” por Bensaccount en Wikipedia en inglés (CC BY 3.0) vía Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" Por Amanthabagdon - Trabajo propio (Dominio público) a través de Commons Wikimedia