Diferencia entre nitrocelulosa y PVDF

Diferencia clave - Nitrocelulosa vs PVDF
 

Western blotting es un método que permite la detección y cuantificación de proteínas específicas de una muestra de proteína. La confiabilidad de la técnica depende de la selección de una membrana correcta para la absorción de proteínas del gel. Existen diferentes tipos de membranas microporosas. Las membranas de nitrocelulosa y PVDF son dos de esas membranas preferidas por los investigadores debido a sus atributos especiales sobre los otros tipos de membranas. La selección entre la nitrocelulosa o PVDF también es otro desafío en la transferencia de Western. Tanto la nitrocelulosa como el PVDF tienen una alta capacidad de absorción de proteínas. La diferencia clave entre la membrana de nitrocelulosa y PVDF es que Las membranas de nitrocelulosa no tienen la capacidad de eliminar los anticuerpos y reutilizar la membrana para reprobar los anticuerpos, mientras que las membranas de PVDF tienen capacidad de extracción y reutilización..

CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es la nitrocelulosa?
3. ¿Qué es PVDF?
4. Comparación lado a lado - Nitrocelulosa vs PVDF
5. Resumen

¿Qué es la nitrocelulosa??

La nitrocelulosa es un polímero fabricado mediante el tratamiento de celulosa con ácido nítrico y se utiliza para fabricar membranas microporosas en biología molecular, especialmente para técnicas de transferencia tales como transferencia Southern, Northern y Western. Los tamaños de poro de las membranas de nitrocelulosa varían de 3 a 20 µm. Las membranas microporosas de nitrocelulosa facilitan la detección de reacciones inmunoquímicas que ocurren en la superficie de la membrana. Por lo tanto, las membranas de nitrocelulosa se utilizan con frecuencia para la inmovilización de proteínas y la detección de proteínas específicas en Western Blot. Las membranas de nitrocelulosa también pueden inmovilizar glucoproteínas y ácidos nucleicos.

Las membranas de nitrocelulosa se prefieren en los ensayos de flujo lateral debido a varias características. Las membranas de nitrocelulosa absorben proteínas en una alta concentración. El disolvente utilizado para humedecer la membrana no disminuye la absorción de proteínas de la membrana de nitrocelulosa. Las membranas de nitrocelulosa se pueden cortar fácilmente al tamaño de gel deseado y transferir proteínas del gel a la membrana mediante transferencia eléctrica o capilar. La nitrocelulosa permite un flujo más rápido de proteínas a través de la membrana con un alto potencial de unión. La nitrocelulosa muestra una mayor fuerza de manejo. Otro atributo especial de la membrana de nitrocelulosa es que se puede pegar fácilmente con adhesivos no solventes resistentes al agua en varios soportes de plástico.

Figura 01: membrana de nitrocelulosa para western blotting

¿Qué es PVDF??

El difluoruro de polivinilideno (PVDF) es un fluoropolímero producido por la polimerización del difluoruro de vinilideno y tiene una alta capacidad de inmovilización de las proteínas. Por lo tanto, las membranas microporosas hechas de PVDF se utilizan en las técnicas de transferencia Western para analizar proteínas específicas de las mezclas de proteínas. Las membranas de PVDF también se pueden usar para el análisis de aminoácidos y la secuenciación de proteínas. La característica más importante de la membrana de PVDF sobre la membrana de nitrocelulosa es que puede eliminarse fácilmente de los anticuerpos y reutilizarse para las siguientes sondas de anticuerpos..

Las membranas de PVDF son más gruesas que las membranas de nitrocelulosa; Por lo tanto, más resistente a los daños durante la reutilización. Las membranas de PVDF son altamente hidrofóbicas. Por lo tanto, deben empaparse en metanol o isopropanol antes de usar.

¿Cuál es la diferencia entre la nitrocelulosa y el PVDF??

Nitrocelulosa vs PVDF
La nitrocelulosa es un polímero compuesto de celulosa..	PVDF es un fluoropolímero producido por la polimerización de difluoruro de vinilideno..
Tamaño de poro de membrana
Los tamaños típicos de los poros son 0.1, 0.2 o 0.45μ	Los tamaños típicos de los poros son 0.1, 0.2 o 0.45μm
Capacidad de unión a proteínas
La nitrocelulosa tiene una capacidad de unión a proteínas de 80 a 100 μg / cm2.	El PVDF tiene una capacidad de unión a proteínas de 170 a 200 μg / cm2.
Sensibilidad
Esto tiene una baja sensibilidad en comparación con el PVDF..	Esto tiene una alta sensibilidad..
Detección de proteínas poco expresadas
Dado que la sensibilidad es baja en las membranas de nitrocelulosa, no es adecuada para la detección de proteínas de baja expresión..	Esto es más adecuado para la detección de proteínas de baja expresión debido a su alta sensibilidad..
Ruido de fondo
Esto tiene menor ruido de fondo	Esto tiene un ruido de fondo más alto.
Interacciones con proteínas
Las moléculas de proteínas se unen a las membranas de nitrocelulosa a través de interacciones hidrofóbicas.	Las proteínas se unen a las membranas de PVDF a través de interacciones hidrófobas y dipolo.
Naturaleza de la membrana
La nitrocelulosa es frágil y frágil. Sin embargo, las versiones de nitrocelulosa están disponibles, y son resistentes.	PVDF es más duradero y tiene mayor resistencia química.
Habilidad para desnudar y reutilizar
La nitrocelulosa puede tener dificultades para pelar y reprobar sin perder la señal.	PVDF es ideal para aplicaciones de reproducción y secuenciación.
Idoneidad
La nitrocelulosa es ideal para detectar proteínas de bajo peso molecular.	El PVDF es más adecuado para detectar proteínas de peso molecular más alto.
Otros usos
La nitrocelulosa se puede utilizar para el análisis de ácidos nucleicos y la transferencia de puntos / ranuras.	PVDF se puede utilizar para la secuenciación de proteínas y sistemas de ensayo en fase sólida.
Costo
Esto es más barato que las membranas de PVDF..	Esto es más caro que las membranas de nitrocelulosa..
Necesidad de prehumedecimiento
Las membranas de nitrocelulosa no requieren una preparación previa con metanol.	Las membranas de PVDF requieren un remojo previo con metanol..

Resumen - Nitrocelulosa vs PVDF

Las membranas de nitrocelulosa fueron las primeras membranas utilizadas comercialmente para el ensayo de flujo lateral. Tienen una alta capacidad de absorción de proteínas. Por lo tanto, las membranas de nitrocelulosa se utilizan en Western blotting. El PVDF es otro tipo de membrana que se usa en Western Blot y también tiene una alta capacidad de absorción de proteínas. Ambos tipos se utilizan en la transferencia de Western para el análisis de proteínas. Sin embargo, las membranas de PVDF tienen atributos más especiales, lo que las hace más adecuadas que las membranas de nitrocelulosa para la transferencia Western. Pero, las membranas de nitrocelulosa son más adecuadas para detectar proteínas de bajo peso molecular, las membranas de PVDF son más adecuadas para detectar proteínas de alto peso molecular. Esta es la diferencia entre las membranas de nitrocelulosa y PVDF..

Imagen de cortesía:
1. "Transferencia Western blot" Por Bensaccount en Wikipedia en inglés (CC BY 3.0) vía Commons Wikimedia

Referencia:
1. Luque-García, José L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun y Thomas A. Neubert. “Uso de membranas de nitrocelulosa para la caracterización de proteínas mediante espectrometría de masas por desorción láser / ionización asistida por matriz”. Química analítica. Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU., 15 de julio de 2006. Web. 28 de marzo de 2017
2. "Marcadores moleculares y biotecnología vegetal". Google Books. N.p., n.d. Web. 28 de marzo de 2017
3.Lunes, 8 de abril de 2013 Tweet. "La magia está en la membrana: elija sabiamente para obtener los mejores resultados de Western Blot". Biocompare. N.p., 08 abr. 2013. Web. 28 de marzo de 2017