Diferencia entre electroforesis horizontal y vertical en gel

Diferencia clave - Electroforesis horizontal frente a gel vertical
 

La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio utilizada en genética para separar mezclas que contienen ADN, ARN y otras proteínas de acuerdo con su respectiva carga y tamaño molecular. El ADN, el ARN o las proteínas que deben separarse en este método se ejecutan a través de un gel que contiene pequeños poros. Las moléculas son conducidas a través del gel por un campo eléctrico. Las moléculas pasan a través de los poros del gel, y la velocidad del movimiento es inversamente proporcional a sus respectivas longitudes. Por lo tanto, las moléculas con un tamaño molecular más bajo se moverán más rápido que las moléculas con un peso molecular más alto. El campo eléctrico es generado por la diferencia de carga en dos extremos del gel. Un extremo contiene una carga positiva, y el otro extremo contiene una carga negativa. Dado que las moléculas de ADN y ARN están cargadas negativamente, serán atraídas hacia el extremo cargado positivamente del gel. La electroforesis en gel puede ser de dos métodos diferentes: electroforesis en gel horizontal y electroforesis en gel vertical. En la electroforesis de gel horizontal, el gel está presente en una orientación horizontal y se sumerge en un tampón de funcionamiento continuo que está presente dentro de la propia caja de gel. En la electroforesis en gel vertical, el sistema de tampón está orientado verticalmente y es discontinuo con dos cámaras presentes en la parte superior e inferior con un cátodo y un ánodo, respectivamente. Esta es la diferencia clave entre la electroforesis horizontal y vertical en gel..

CONTENIDO

1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es la electroforesis horizontal en gel?
3. ¿Qué es la electroforesis en gel vertical?
4. Similitudes entre la electroforesis horizontal y vertical en gel
5. Comparación lado a lado - Electroforesis horizontal frente a gel vertical en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la electroforesis horizontal en gel??

La electroforesis horizontal en gel utiliza la teoría básica para la separación de moléculas de ADN, ARN o proteínas según su respectivo tamaño molecular y carga. En esta técnica, el gel está presente en una orientación horizontal y se sumerge en un tampón que es continuo. El gel de agarosa se utiliza para separar la caja de gel en dos compartimentos. Un extremo de la caja de gel contiene un ánodo, mientras que el otro extremo contiene un cátodo. Cuando se aplica una corriente, el búfer utilizado en esta técnica permite la creación de un gradiente de carga. Cuando se aplica la carga, el gel tiende a calentarse. El tampón también funciona como refrigerante, que mantiene la temperatura en niveles óptimos. La recirculación del tampón en ejecución evita la formación de un gradiente de pH. No se puede utilizar un sistema de tampón discontinuo en la electroforesis horizontal en gel ya que los dos compartimentos del sistema de gel se conectan con el tampón de funcionamiento. La acrilamida se usa durante la electroforesis en gel para separar las mezclas de proteínas.

Figura 01: Electroforesis horizontal en gel.

En la electroforesis horizontal en gel, la acrilamida no puede utilizarse ya que la caja de gel está expuesta al oxígeno. Debido a la presencia de oxígeno, se inhibe la polimerización de la acrilamida, lo que interfiere con la formación del gel. La electroforesis horizontal en gel es un método sin esfuerzo que se utiliza en la separación de ADN y ARN.

¿Qué es la electroforesis en gel vertical??

La técnica de electroforesis en gel vertical funciona de acuerdo con la teoría primaria de la electroforesis en gel, pero se considera que es más compleja que el método de electroforesis en gel horizontal. Esta técnica utiliza un tampón discontinuo. Un cátodo está ubicado en la cámara superior, y el ánodo está ubicado en la cámara inferior. Los electrodos presentes en cada compartimento proporcionan el campo eléctrico requerido. Una capa delgada de gel se vierte entre las dos placas de vidrio montadas. Por lo tanto, la parte superior del gel se sumerge en la cámara superior, y la parte inferior del gel se sumerge en la cámara de la parte inferior. Una vez que se aplica la corriente, una pequeña porción del tampón se mueve a la cámara inferior desde la cámara superior a través del gel. La corriente aplicada en esta técnica es de unidades minuciosas..

Figura 02: Electroforesis en gel vertical.

En la electroforesis en gel vertical, el tampón solo fluye a través del gel. Esto permite un control preciso del gradiente de voltaje durante la etapa de separación. Puede utilizarse gel de acrilamida ya que los compartimentos no están expuestos al oxígeno atmosférico. Debido al tamaño de poro más pequeño del gel de acrilamida, se puede lograr una separación precisa con una resolución más alta.

¿Cuáles son las similitudes entre la electroforesis horizontal y vertical en gel??

• Ambos sistemas funcionan de acuerdo con la teoría básica de la electroforesis en gel..
• El ánodo y el cátodo se utilizan para proporcionar el campo eléctrico requerido en ambos sistemas.

¿Cuál es la diferencia entre la electroforesis horizontal y vertical en gel??

Electroforesis horizontal frente a gel vertical
La electroforesis horizontal en gel es una técnica de electroforesis en gel en la que el gel está presente en una orientación horizontal..	La electroforesis en gel vertical es una técnica de electroforesis en gel en la que el gel se orienta verticalmente.
Buffer
La electroforesis horizontal en gel consiste en un tampón continuo..	El tampón de marcha es discontinuo en electroforesis en gel vertical..
Uso de acrilamida
La acrilamida no puede utilizarse para la electroforesis horizontal en gel ya que la caja de gel está expuesta a oxígeno atmosférico.	Dado que el gel no está expuesto al oxígeno atmosférico debido a dos cámaras separadas, la acrilamida podría utilizarse para la electroforesis vertical en gel..
Función
La electroforesis horizontal en gel se usa más a menudo para la separación de mezclas de ADN y ARN pero no de proteínas.	La electroforesis en gel vertical se utiliza para separar mezclas de proteínas..

Resumen - Electroforesis horizontal frente a gel vertical

La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio que se usa ampliamente en la separación de mezclas que contienen moléculas de ADN, ARN y proteínas. Hay dos métodos de electroforesis en gel: electroforesis horizontal y vertical en gel. En la electroforesis horizontal en gel, el tampón de funcionamiento es continuo, mientras que en la electroforesis vertical en gel, es discontinuo. Esta es la diferencia entre la electroforesis horizontal y vertical en gel. Ambos sistemas funcionan de acuerdo con el principio común de la electroforesis en gel..

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Referencias:

1.Warren, Chad M., et al. "Electroforesis en gel de agarosa vertical y electrotransferencia de proteínas de alto peso molecular". Electroforesis, vol. 24, no. 11, 2003, pp. 1695-1702., Doi: 10.1002 / elps.200305392.
2. “Sistemas de gel horizontales y verticales: el sistema de gel horizontal”. National Diagnostics, Disponible aquí. Consultado el 28 de agosto de 2017.

Imagen de cortesía:

1. "Aparato de electroforesis en gel" Por Jeffrey M. Vinocur - Trabajo propio (CC POR 2.5) vía Commons Wikimedia
2. “Electroforesis de proteínas en gel de poliacrilamida” por Jean-Etienne Minh-Duy Poirrier de Bruxelles, Bélgica - Proteínas en una electroforesis en gel 1D (CC BY-SA 2.0) vía Commons Wikimedia