Diferencia entre clonación y subclonación

Diferencia clave - Clonación vs Subclonación
 

La clonación y la subclonación son procedimientos de biología molecular que crean células u organismos genéticamente idénticos que llevan el ADN o el gen que son de interés. La clonación es una técnica que implica la inserción del gen o ADN interesado en un vector, su replicación dentro de una bacteria huésped y la producción de células u organismos que son copias exactas de la composición genética. La subclonación es una técnica que implica la inserción del gen de interés, que ya está insertado en un vector, en un vector secundario, su replicación dentro de una bacteria huésped y la producción de copias genéticamente idénticas de células u organismos. La diferencia clave entre la clonación y la subclonación es que, en la clonación, el gen de interés, una vez ligado en un vector, continúa el proceso de clonación mientras que, en la subclonación, el gen de interés ya clonado se separa del vector principal y se inserta nuevamente en un vector receptor y continúa el proceso.

CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es la clonación?
3. ¿Qué es la subclonación?
4. Comparación lado a lado - Clonación vs Subclonación
5. Resumen

¿Qué es la clonación??

La clonación es el procedimiento que produce organismos o células genéticamente idénticos. En la naturaleza, la clonación se produce en los medios de reproducción asexual. Cuando no hay recombinación genética o alteración, las células hijas reciben la misma composición genética del padre. Los organismos procarióticos y eucariotas crean clones por fisión binaria, brotes, mitosis, etc. En la biología molecular, los genes de clonación o fragmentos específicos de ADN es un método popular para estudiar la estructura y función de esa sección de ADN en particular..

El principal objetivo de la clonación molecular es hacer millones de copias de células u organismos genéticamente idénticos que tengan el fragmento de ADN de interés (principalmente genes). Crea organismos con copias genéticas exactas de otro. Principalmente, los genes específicos se clonan en estudios moleculares para obtener información estructural y funcional y para la secuenciación del ADN. Además, para la producción de proteínas o productos específicos a gran escala, la clonación es ampliamente utilizada.

Procedimiento de clonación

Los pasos básicos del procedimiento de clonación son los siguientes.

1. Identificación y aislamiento del gen de interés. (Amplificación del gen de interés por PCR)..
2. Digestión de restricción del gen de interés (la endonucleasa de restricción corta el gen).
3. Restricción de la digestión del vector ADN. (El ADN del vector también se corta utilizando la misma endonucleasa de restricción).
4. Inserción del gen en el vector y formación de la molécula recombinante.
5. Transformación del vector recombinante en una bacteria huésped..
6. Aislamiento e identificación de las bacterias transformadas (el vector plasmídico debe contener un gen seleccionable, más comúnmente un gen de resistencia a los antibióticos para detectar bacterias transformadas).
7. Expresión de genes recombinantes dentro del huésped..

Figura_01: Procedimiento de clonación

¿Qué es la subclonación??

La subclonación es un procedimiento para mover un gen de interés de un vector a otro para ver la expresión del gen para obtener la funcionalidad deseada del gen. En este método, dos vectores están involucrados; a saber, vector padre y vector de destino. Las inserciones clonadas se mueven nuevamente a un segundo vector en la subclonación. El objetivo de transferir el gen del primer vector al segundo vector es obtener algo que el primer vector no pueda hacer o separar un gen nuevamente dentro del fragmento de ADN ya clonado y expresarlo solo. Las enzimas de restricción se utilizan en este procedimiento al principio.

Procedimiento de subclonación

Los pasos básicos de la subclonación son los siguientes.

1. Con la ayuda de las endonucleasas de restricción, la separación del ADN de interés en el plásmido donante (vector principal).
2. Amplificación del ADN de interés mediante PCR..
3. Purificación del producto de PCR (ADN de interés) por electroforesis en gel..
4. Apertura del plásmido receptor por las mismas endonucleasas de restricción utilizadas para separar el ADN de interés en el plásmido parental.
5. Ligación del ADN de interés (gen) en el plásmido receptor para crear el plásmido subclonado.
6. Transformación del vector subclonado en una bacteria huésped competente.
7. Cribado de células transformadas.
8. Purificación del ADN plasmídico y uso para la secuenciación del ADN o la expresión de los genes para obtener los productos deseados..

La subclonación se lleva a cabo en ocasiones para aislar un gen del grupo de genes clonado o cuando se requiere que el gen de interés se transfiera a un plásmido útil para ver la función exacta del gen de interés..

Figura_02: Procedimiento de subclonación

¿Cuál es la diferencia entre Clonación y Subclonación??

Clonación vs Subclonación
La clonación es el procedimiento que produce organismos o células genéticamente idénticos..	La subclonación es un procedimiento para mover un gen de interés de un vector a otro para ver la expresión del gen y obtener la funcionalidad deseada del gen..
Proceso
Separar el ADN de interés del organismo e insertarlo en un vector una vez y clonado.	El ADN ya clonado se separa del primer vector y se inserta en un segundo vector y se clona.
Insertar movimiento a través de vectores
No mueve inserciones (ADN de interés) de un vector a otro vector.	Mover inserciones del vector padre al vector de destino.

Resumen - Clonación vs Subclonación

La clonación crea células u organismos genéticamente idénticos con el gen insertado o el ADN de interés. Procede a través de la separación e inserción del ADN de interés en un vector y expresión dentro de una bacteria huésped. La subclonación comparte pasos similares con la clonación. Sin embargo, en la subclonación, el fragmento de ADN ya clonado (gen de interés) se inserta en un vector y se transforma en una bacteria huésped. Esa es la diferencia clave entre la clonación y la subclonación..

Referencias

1. Lodish, Harvey. “Clonación del ADN con vectores de plásmidos”. Biología molecular de células. 4ª edición. Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU., 01 de enero de 1970. Web. 05 mar. 2017
2. "Subclonación". Wikipedia. Fundación Wikimedia, 14 de febrero de 2017. Web. 06 mar. 2017
3. “Subclonación”. Subclonación | Artículos de acceso abierto | Revistas de acceso abierto | Actas de la Conferencia | Editores | Autores | Revisores | eventos cientificos N.p., n.d. Web. 06 mar. 2017
4. Wackerhage, Henning. "Cómo subclonar". Cómo subclonar. N.p., 01 de enero de 1970. Web. 06 mar. 2017

Imagen de cortesía

1. Procedimiento de clonación molecular - Por CNX OpenStax [CC BY 4.0], a través de Wikimedia Commons
2. Procedimiento de subclonación: el cargador original fue Takometer en la Wikipedia en inglés (transferido de en.wikipedia a Commons). [CC POR 2.5], a través de Wikimedia Commons