Diferencia entre AFLP y RFLP

Diferencia clave - AFLP vs RFLP

Los estudios de ADN tienen una importancia inmensa para comprender y determinar las relaciones filogenéticas, diagnosticar enfermedades genéticas y cartografiar los genomas de los organismos. Varias técnicas asociadas con el análisis de ADN también se utilizan para la identificación de un gen particular o una secuencia de ADN en un conjunto de ADN desconocido. Son conocidos como marcadores moleculares.. Polimorfismo de longitud de fragmento amplificado (AFLP) y Restricción Fragmento Longitud Polimorfismo (RFLP) son dos de estos marcadores moleculares (métodos) desarrollados en biología molecular para detectar variaciones genéticas entre organismos. Ambos métodos son igualmente importantes y tienen ventajas y desventajas. La diferencia clave entre AFLP y RFLP es que AFLP implica la amplificación por PCR selectiva del ADN digerido, mientras que la RFLP no implica la amplificación por PCR selectiva de los fragmentos de ADN.

CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. Qué es AFLP
3. Qué es RFLP
4. Comparación lado a lado - AFLP vs RFLP
5. Resumen

Qué es AFLP?

AFLP (Polimorfismo de longitud de fragmento amplificado) es una herramienta importante en biología molecular y se usa ampliamente en el análisis de variación genética. La AFLP se basa en la amplificación por PCR específica del ADN genómico fragmentado y la detección del polimorfismo mediante autorradiografías mediante electroforesis en gel. AFLP contribuye ampliamente a la identificación de diferencias genéticas en cepas o especies estrechamente relacionadas de varios reinos, incluyendo plantas, animales, bacterias y hongos. La AFLP se puede llevar a cabo con pequeñas cantidades de muestras de ADN desconocidas. No requiere conocimientos previos de secuencia y diseño de sondas..

Pasos de la AFLP

Aislamiento de ADN
Digestión del ADN con endonucleasas de restricción.
Ligadura de los fragmentos de ADN restringidos con adaptadores.
Amplificación selectiva de los fragmentos con sitios de restricción específicos.
Separación de los productos de PCR por electroforesis en gel.
Visualización de la matriz de gel por autorradiografía.

El AFLP es un método más sensible y reproducible que se puede usar en la elaboración de perfiles de ADN de varios taxones, incluidos hongos, bacterias, plantas y animales, sin conocimiento previo de las secuencias de ADN. Ayuda a identificar pequeñas diferencias entre individuos en poblaciones debido a su naturaleza altamente sensible. AFLP también es importante en el mapeo del genoma, estudios forenses, pruebas parentales, genotipado, etc..

Figura 01: AFLP

Qué es RFLP?

Los polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) es una técnica que se utiliza para detectar las variaciones genéticas en secuencias de ADN homólogas. Es el primer método desarrollado para perfilar el ADN. Los organismos tienen huellas dactilares de ADN únicas o perfiles de ADN. El RFLP sirve como una herramienta importante para analizar la variación entre los perfiles de ADN de organismos intraespecíficos o estrechamente relacionados, ya que las secuencias homólogas tienen diferentes sitios de restricción (ubicaciones) que son únicos para un organismo en particular. Cuando el ADN homólogo se digiere con endonucleasas de restricción específicas, resultará en diferentes perfiles de ADN que son únicos para cada individuo. Por lo tanto, el principal de este método es la detección de la variación genética entre los organismos mediante la restricción del ADN homólogo con enzimas de restricción específicas y el análisis del polimorfismo de la longitud del fragmento a través de electroforesis en gel y transferencia. Los patrones de transferencia son exclusivos de cada organismo y caracterizan los genotipos específicos..

Pasos de RFLP

Aislamiento de suficiente cantidad de ADN a partir de muestras.
Fragmentación de las muestras de ADN con endonucleasas de restricción específicas en una secuencia corta
Separación de los fragmentos resultantes con diferentes longitudes mediante electroforesis en gel de agarosa..
Transferencia del perfil de gel a una membrana por transferencia Southern
Hibridación de la membrana con sondas marcadas y análisis del polimorfismo de la longitud del fragmento en cada perfil.

El RFLP es una técnica muy importante para detectar la herencia de la enfermedad y detectar el riesgo de que ocurra la enfermedad entre los miembros de la familia. El RFLP también se usa con frecuencia en el mapeo del genoma, la identificación de criminales en pruebas forenses, pruebas de paternidad, etc. El RFLP también tiene varias limitaciones. RFLP requiere el conocimiento previo de datos de secuencia para diseñar sondas para hibridación. También requiere el aislamiento de una cantidad suficiente de ADN de la muestra para analizar, lo que es difícil en los estudios forenses..

Figura 01: Mapeo de RRFLP

¿Cuál es la diferencia entre AFLP y RFLP??

ALFP vs RFLP
AFLP implica la amplificación por PCR selectiva del ADN digerido.	RFLP no implica PCR a menos que sea PCR-RFLP.
Conocimiento de la secuencia
No se requiere conocimiento de secuencia previa.	Se requiere un conocimiento previo de la secuencia para diseñar sondas RFLP.
Confiabilidad
Esto es mas confiable.	Esto es menos confiable en comparación con AFLP.
Eficiencia en la detección de polimorfismo
Esto tiene una mayor eficiencia en la detección de polimorfismo que el RFLP..	Esto es menos eficiente en comparación con AFLP.
Costo
Esto es un poco caro en comparación con RFLP.	Esto es menos costoso en comparación con AFLP.
Aplicaciones
Los AFLP se han aplicado al mapeo del genoma, a las huellas de ADN, a los estudios de diversidad genética, a las pruebas de paternidad y al análisis forense.	El análisis RFLP es una herramienta importante en el mapeo del genoma, la localización de genes para trastornos genéticos, la determinación del riesgo de enfermedad y las pruebas de paternidad.

Resumen - AFLP vs RFLP

AFLP y RFLP son dos técnicas utilizadas como marcadores genéticos para la evaluación de la diversidad y la evaluación de las relaciones genéticas en biología molecular. El AFLP sirve como un método eficiente y sensible para la detección del polimorfismo genético entre organismos que el RFLP. Sin embargo, aunque estos dos métodos tienen diferentes eficiencias en la detección de variaciones genéticas, todavía se utilizan para la identificación de ADN y el diagnóstico de enfermedades..

Referencia:
«1. García, Antonio A. F., Luciana L. Benchimol, Antônia M. M. Barbosa, Isaías O. Geraldi, Souza Jr. Cláudio L. y Anete P. De Souza. “Comparación de marcadores de RAPD, RFLP, AFLP y SSR para estudios de diversidad en líneas consanguíneas de maíz tropical”. Genética y biología molecular. Sociedade Brasileira de Genética, 2004. Web. 19 de marzo de 2017
2. “Polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP)”. Centro Nacional de Información de Biotecnología. Biblioteca Nacional de Medicina de los Estados Unidos, n.d. Web. 19 de marzo de 2017
3. Masiga D. K. y Turner C. M. (2004). “Análisis de polimorfismo de longitud de fragmento amplificado (restricción) (AFLP)”. Métodos Mol Biol: 270: 173-86. NCBI. Web. 19 de marzo de 2017

Imagen de cortesía:
1. "ALFP" Por Barbarroja en Wikipedia en holandés - Transferido de nl.wikipedia a Commons. (Dominio público) a través de Commons Wikimedia
2. “Mapeo RFLP” Por Retama - Trabajo propio (GFDL) a través de Commons Wikimedia

Biología