Diferencia entre la capa fina de papel y la cromatografía de columna

Diferencia clave - Papel vs Capa delgada vs Columna Cromatografía
 

La cromatografía en papel, la cromatografía en capa fina y la cromatografía en columna son tres tipos de técnicas cromatográficas. los diferencia clave Entre la cromatografía en papel, la cromatografía en capa fina y la cromatografía en columna se basan en el tipo de fase estacionaria utilizada en la técnica de cromatografía.. La cromatografía en papel utiliza un papel de celulosa como su fase estacionaria, la cromatografía de capa fina usa alúmina o gel de sílice como su fase estacionaria, mientras que la cromatografía en columna utiliza una columna empaquetada con un material de matriz adecuado como su fase estacionaria..

En el proceso de separación e identificación de biomoléculas como proteínas y carbohidratos, la cromatografía es una técnica biofísica importante utilizada. La cromatografía separa los compuestos en función de su solubilidad, tamaño y carga. En función del mecanismo de separación, la cromatografía utiliza mecanismos como el intercambio iónico, la absorción, la partición y la exclusión de tamaño, y existen tres técnicas cromatográficas; A saber, cromatografía de papel, capa fina y columna. La cromatografía en papel se basa en la adsorción y solubilidad sólido-líquido del compuesto, y utiliza un papel de celulosa como fase estacionaria. La cromatografía de capa fina se basa en la adsorción sólido-líquido de las moléculas. Tiene una fase estacionaria que típicamente está hecha de alúmina o gel de sílice y la fase móvil que es el solvente. La cromatografía en columna utiliza una columna empaquetada con una matriz que se utiliza para separar moléculas principalmente en función de su tamaño, afinidad o carga..

CONTENIDO

1. Resumen de la cromatografía y diferencia clave
2. ¿Qué es la cromatografía de papel?
3. ¿Qué es la cromatografía de capa fina?
4. ¿Qué es la cromatografía en columna?
5. Similitudes entre la cromatografía de papel, capa fina y columna
6. Comparación lado a lado - Cromatografía en papel frente a capa delgada frente a columna en forma tabular
7. Resumen

¿Qué es la cromatografía de papel??

La cromatografía en papel es el tipo de cromatografía más simple que se usa, y no se usa para una investigación extensa. Se utiliza principalmente en laboratorios de estudiantes para identificar biomoléculas como los aminoácidos y los carbohidratos presentes en las mezclas. La cromatografía en papel utiliza una fase estacionaria que se realiza con papel de celulosa o papel de filtro Whatman y una fase móvil que generalmente se prepara con solventes orgánicos como el n-butanol, etc. La fase estacionaria está saturada con agua, lo que hace que la fase estacionaria sea líquida. De este modo, cuando los compuestos se manchan y se dejan correr en presencia de la fase móvil, dependiendo de la solubilidad de los compuestos, se separan. Por lo tanto, tras el desarrollo del cromatograma, se puede realizar una tinción para determinar la duración de cada compuesto. El factor de retención se puede calcular.

Figura 01: Cromatografía en papel.

La cromatografía en papel puede clasificarse adicionalmente como cromatografía en papel ascendente y cromatografía en papel descendente en función de la dirección del disolvente en ejecución.

¿Qué es la cromatografía de capa fina??

Cromatografía de capa fina o TLC Es una técnica comúnmente utilizada para identificar diferentes aminoácidos presentes en una mezcla o para la identificación de proteínas. La técnica de separación se basa en la adsorción sólido-líquido. Durante la cromatografía de capa fina, se utiliza una placa hecha de alúmina o gel de sílice como fase estacionaria. La mezcla de disolventes varía según el requisito y puede usar diferentes combinaciones de compuestos orgánicos como el n-butanol, el ácido acético y el agua para preparar el disolvente. Los compuestos a separar se manchan en la placa y se sumergen en la mezcla de disolventes. Una vez que el disolvente se desplaza en función de la acción capilar dada por la placa, los compuestos manchados en la placa también se mueven dependiendo de su solubilidad en el disolvente..

Figura 02: Cromatografía de capa fina

La detección de las manchas después del cromatograma se realiza mediante diferentes procedimientos de tinción. Algunos usan tinción con ninhidrina, que es un método bastante tóxico para la tinción. Los cromatogramas de capa fina modernos utilizan técnicas de fluorescencia para ver el cromatograma después de la ejecución. Dependiendo de las distancias recorridas, se puede calcular el tiempo de retención de cada compuesto. Esto se puede usar para identificar el tipo de compuesto separado según la mezcla utilizada. La TLC se usa principalmente para identificar aminoácidos en una mezcla de proteínas y también para separar diferentes tipos de monosacáridos presentes en una mezcla.

¿Qué es la cromatografía en columna??

Cromatografía en columna es un término amplio que se usa para describir muchos tipos de técnicas de cromatografía que utilizan el método de separación basado en columnas. En la cromatografía en columna, se utiliza una columna física con un material de embalaje para separar los compuestos. La separación puede basarse en diferentes propiedades físicas exhibidas por los compuestos. Estas propiedades pueden ser la carga, el tamaño, la conformación 3D y la capacidad de enlace, etc. Así, la columna empaquetada con el material de la matriz actúa como la fase estacionaria y el tampón de lavado aplicado a la columna actúa como la fase móvil..

Si las moléculas se separan según el tamaño, el material de empaque se empaqueta de manera que deje los poros para que los compuestos viajen. Así, las moléculas más grandes que no pueden fluir a través de los poros se eluyen primero, mientras que las moléculas más pequeñas toman mucho más tiempo para eluir.

Figura 03: Cromatografía en columna.

Si las moléculas se separan en función de su carga, la fase estacionaria contendrá un anión o un intercambiador de cationes al que los compuestos serán atraídos en función de su carga. Así, durante la etapa de lavado, los compuestos no unidos se eluirán. Al agregar el tampón de elución, los compuestos cargados unidos se eluirán. La detección de estos eluyentes se basa principalmente en técnicas espectrofotométricas..

¿Cuáles son las similitudes entre la capa fina de papel y la cromatografía en columna??

• Todas las técnicas de cromatografía de columna y capa fina de papel se utilizan para la separación de biomoléculas, como aminoácidos, proteínas y carbohidratos..
• Las técnicas de papel de capa fina y cromatografía de columna tienen una fase móvil y una fase estacionaria..
• Las técnicas de papel de capa fina y cromatografía de columna utilizan mecanismos biofísicos para la separación.

¿Cuál es la diferencia entre la capa fina de papel y la cromatografía en columna??

Cromatografía papel frente a capa fina frente a columna
Cromatografía en papel	La cromatografía en papel es una técnica cromatográfica que se utiliza para separar compuestos en función de la adsorción líquido-líquido y la solubilidad del compuesto. Utiliza un papel de celulosa como su fase estacionaria..
Cromatografía de capa fina	La cromatografía de capa fina es otra técnica cromatográfica basada en la adsorción sólido-líquido de moléculas. Tiene una fase estacionaria hecha de alúmina o gel de sílice y un disolvente como la fase móvil, que es el disolvente..
Cromatografía de columna	La cromatografía en columna utiliza una columna empaquetada con una matriz que se utiliza para separar moléculas principalmente en función de su tamaño, afinidad o carga..
Fase estacionaria
Cromatografía en papel	El papel hecho de nitrocelulosa de Whatman se usa como fase estacionaria en la cromatografía de papel..
Cromatografía de capa fina	Se utiliza alúmina o gel de sílice como la fase estacionaria de la cromatografía de capa fina..
Cromatografía de columna	Una columna empaquetada con material de empaque adecuado se utiliza como la fase estacionaria en la cromatografía de columna..
Fase móvil
Cromatografía en papel	El solvente corriente es la fase móvil de la cromatografía en papel..
Cromatografía de capa fina	El solvente corriente es la fase móvil de la cromatografía de capa fina..
Cromatografía de columna	El tampón de lavado es la fase móvil de la cromatografía en columna..
Mecanismos utilizados para la separación
Cromatografía en papel	La cromatografía en papel se basa en la absorción sólido-líquido..
Cromatografía de capa fina	La cromatografía en capa fina se basa en la absorción sólido-líquido..
Cromatografía de columna	La cromatografía en columna se basa en la exclusión de tamaño, carga y forma.
Buffer de elución
Cromatografía en papel	No requerido por cromatografía en papel..
Cromatografía de capa fina	No requerido para cromatografía de capa fina..
Cromatografía de columna	Requerido en cromatografía de columna..
Detección
Cromatografía en papel	Tinción y determinando el factor de retención..
Cromatografía de capa fina	Tinción y determinando el factor de retención..
Cromatografía de columna	Determinación espectrofotometrica.

Resumen - Papel Thin Layer vs Columna Cromatografía

La cromatografía en papel, la TLC y la cromatografía en columna son técnicas de separación utilizadas para separar biomoléculas como proteínas, aminoácidos y carbohidratos (principalmente monosacáridos). La cromatografía en papel utiliza un papel de celulosa como fase estacionaria, y el mecanismo de separación se basa en la adsorción sólido-líquido. TLC también utiliza mecanismos de adsorción sólido-líquido. Las moléculas se separan en la fase estacionaria, dependiendo de su solubilidad en la fase móvil. La cromatografía en columna utiliza propiedades físicas como el tamaño, la forma, la carga y el peso molecular del compuesto para separar. La columna empaquetada con el material de la matriz actúa como la fase estacionaria, mientras que el tampón de lavado actúa como la fase solvente. Esta es la diferencia entre una capa delgada de papel y una cromatografía en columna..

Referencia:

1.Clark, Jim. “CROMATOGRAFÍA DE LA CAPA FINA”. Cromatografía de capa fina, 2007. Disponible aquí 
2.Coskun, Ozlem. “Técnicas de separación: cromatografía”. Northern Clinics of Istanbul, Kare Publishing, 2016. Disponible aquí 

Imagen de cortesía:

1. 'Tanque de cromatografía' (CC BY-SA 3.0) vía Commons Wikimedia  
2.'Tlc secuencia'By Quantockgoblin, (dominio público) a través de Commons Wikimedia
3.Cromatografía en columna (dominio público) a través de Commons Wikimedia