¿Cuál es la diferencia entre el plásmido de digestión simple y el plásmido de digestión doble?

los diferencia principal entre un solo plásmido digerido y un plásmido digerido doble es que las enzimas de restricción únicas dan como resultado un plásmido digerido individual mientras que dos tipos diferentes de enzimas de restricción dan como resultado un plásmido digerido doble. Además, la inserción del fragmento de ADN extraño puede ocurrir en ambas orientaciones con plásmidos digeridos mientras que la inserción del fragmento de ADN extraño solo ocurre en la orientación correcta con plásmidos de doble digestión..

Plásmido de digestión única y plásmido de doble digestión son dos tipos de plásmidos utilizados en la tecnología de ADN recombinante para producir ADN recombinante.

Áreas clave cubiertas

1. ¿Qué es un plásmido de digestión única?
     - Definición, Autoligación, Orientación.
2. ¿Qué es un plásmido de doble digestión?
     - Definición, Doble Digestión, Orientación.
3. ¿Cuáles son las similitudes entre el plásmido de digestión simple y el plásmido de digestión doble?
     - Esquema de características comunes
4. ¿Cuál es la diferencia entre el plásmido de digestión simple y el plásmido de digestión doble?
     - Comparación de diferencias clave

Términos clave

Plásmido digerido doble, Digestión doble, Orientación, Plásmido recombinante, Plásmido digerido simple, Digestión única

¿Qué es un plásmido de digestión única?

Los plásmidos de una sola digestión son un tipo de plásmidos que se digieren solo con una sola enzima de restricción. Por lo tanto, este proceso se llama digestión única. En general, los plásmidos utilizados en la tecnología de ADN recombinante solo contienen un único sitio de restricción para una enzima de restricción particular. Por lo tanto, la digestión única hace que el plásmido circular sea lineal, produciendo un solo fragmento de ADN. Los dos extremos de este fragmento de ADN son compatibles entre sí; por lo tanto, pueden sufrir autoligado durante la ligadura posterior con el inserto. 

Figura 1: Plásmido de digestión única

Aquí, el inserto también tiene que ser digerido con la misma enzima de restricción para producir extremos compatibles con el plásmido. Por lo tanto, la ligadura se produce en dos orientaciones posibles: en la orientación 5 'a 3' y la orientación 3 'a 5'. Sin embargo, las inserciones con la misma orientación que la región promotora pueden someterse a transcripción. Por lo tanto, esta orientación se conoce como orientación adecuada. Antes de continuar, los plásmidos recombinantes con la orientación adecuada deben seleccionarse seleccionando las colonias transformadas, ya sea mediante PCR o mediante ensayos bioquímicos..

¿Qué es un plásmido de doble digestión?

Los plásmidos de doble digestión son los plásmidos que se someten a una doble digestión con dos enzimas de restricción. Aquí, esta reacción se puede llevar a cabo en un solo tubo. Los sitios de restricción para ambas digestiones ocurren dentro del sitio de reconocimiento de restricción en el plásmido. Por lo tanto, la reacción de doble digestión también resulta en un solo fragmento de ADN. Pero, cada uno de los dos extremos es producido por una enzima de restricción diferente. Por lo tanto, estos extremos no son compatibles entre sí y no se someten a autoligado..

Figura 2: Plásmido de doble digestión

Lo más importante es que el inserto se puede ligar en la orientación adecuada con plásmidos de doble digestión al digerir los extremos del inserto para ligar en la orientación correcta. Por lo tanto, los plásmidos de doble digestión solo producen los plásmidos recombinantes con la orientación adecuada, lo que hace innecesaria la selección subsiguiente de la orientación. Esto ahorra tiempo ya que reduce un paso completo del procedimiento de producción de ADN recombinante.

Similitudes entre el plásmido de digestión simple y el plásmido de digestión doble

• Plásmido de digestión única y plásmido de doble digestión son dos tipos de plásmidos utilizados en la tecnología de ADN recombinante.
• Tanto la digestión única como la digestión doble se pueden realizar mediante una reacción de un solo paso..
• Además, en ambos, el fragmento de ADN extraño se inserta entre los dos extremos de los plásmidos digeridos.
• Además, tanto la digestión única como la doble de un plásmido producen un fragmento de ADN único, mientras que dos fragmentos de ADN se producen cuando se digiere un plásmido recombinante.

Diferencia entre el plásmido de digestión simple y el plásmido de digestión doble

Definición

Plásmido de digestión única se refiere a un plásmido digerido por una enzima de restricción única, mientras que plásmido de digestión doble se refiere a un plásmido digerido por dos enzimas de restricción diferentes. Estas definiciones explican la diferencia principal entre el plásmido de digestión simple y el plásmido de digestión doble..

Finaliza

En los plásmidos de una sola digestión, la digestión con la misma enzima de restricción produce ambos extremos, mientras que en los plásmidos de doble digestión, la digestión con una enzima de restricción diferente produce cada extremo. Por lo tanto, esta es una diferencia principal importante entre el plásmido de digestión simple y el plásmido de digestión doble..

Autoligado

Además, la auto-ligadura es una diferencia principal entre el plásmido de digestión única y el plásmido de digestión doble. Los extremos de los plásmidos de una sola digestión son compatibles entre sí para la auto-ligadura, mientras que los extremos de los plásmidos de doble digestión no son compatibles entre sí para la auto-ligación..

Importancia

Además, la inserción de un fragmento de ADN extraño puede ocurrir en ambas orientaciones en los plásmidos de una sola digestión, mientras que la inserción de un fragmento de ADN extraño se puede realizar en la orientación adecuada en los plásmidos de doble digestión..

Tipos de plásmidos recombinantes

Un plásmido de una sola digestión puede producir tres tipos de plásmidos: dos plásmidos recombinantes con orientaciones opuestas y un plásmido autoligado sin un inserto. Mientras tanto, un plásmido de doble digestión puede producir solo un tipo de plásmido recombinante, que está en la orientación adecuada. Por lo tanto, esta es otra diferencia principal entre el plásmido digerido simple y el plásmido digerido doble. 

Ahorrar tiempo

Los fragmentos recombinantes de plásmidos de una sola digestión deben seleccionarse por su orientación adecuada, mientras que los plásmidos de doble digestión aseguran la orientación adecuada del fragmento de ADN extraño. Por lo tanto, los plásmidos de doble digestión ahorran tiempo en las técnicas de ADN recombinante, no en los plásmidos de digestión única..

Conclusión

Los plásmidos de una sola digestión se digieren con una sola enzima de restricción, lo que da como resultado extremos compatibles con la autoligado. Además, su ligación con el fragmento de ADN extraño puede ocurrir en ambas orientaciones. Por lo tanto, deben seleccionarse plásmidos recombinantes con la orientación adecuada. Por otro lado, los plásmidos de doble digestión se digieren con dos enzimas de restricción diferentes. Por lo tanto, los dos extremos no son compatibles para la auto-ligación. Además, el fragmento de ADN extraño puede ligarse en la orientación adecuada con plásmidos de doble digestión. Por lo tanto, la principal diferencia entre el plásmido de digestión única y el plásmido de digestión doble es el tipo de digestión y la orientación del inserto..

Referencia:

1. Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. Una introducción al análisis genético. 7ª edición. Nueva York: W. H. Freeman; 2000. Fabricación de ADN recombinante. Disponible aquí