¿Cómo funciona Southern Blotting

La transferencia de Southern es una técnica utilizada para la detección de un fragmento de ADN específico dentro de una muestra. La técnica de transferencia implica la separación de fragmentos de ADN en función del tamaño mediante electroforesis en gel, transferir la muestra de ADN fraccionada por tamaño a una membrana de filtro, hibridar los fragmentos de ADN específicos con una sonda marcada, específica de secuencia y detectar las bandas marcadas.

Además de la identificación de ADN específico en una muestra, el tamaño y la abundancia de un tipo particular de ADN también pueden determinarse mediante transferencia de Southern. El proceso involucrado en la transferencia de Southern se describe en este artículo.

Áreas clave cubiertas

1. Que es Southern Blotting
     - Definición, Principio, Aplicaciones
2. ¿Cómo funciona Southern Blotting
     - Proceso de Southern Blotting

Términos clave: ADN, electroforesis en gel, sonda de hibridación, membrana de nailon, digestión de restricción, transferencia de Southern

Que es Southern Blotting

La transferencia de Southern es una técnica de hibridación utilizada en la identificación de ADN específico en una muestra. La técnica fue desarrollada por primera vez por Edward M. Southern en 1975. Este proceso identifica las secuencias de ADN, el tamaño y la abundancia de una secuencia de ADN particular dentro de una muestra..

Una membrana de transferencia Southern se muestra en Figura 1.

Figura 1: Membrana de transferencia Southern

Aplicaciones de Southern Blotting

Las aplicaciones de transferencia de Southern se describen a continuación.

1. Para detectar un fragmento de ADN particular
2. Para aislar un fragmento de ADN particular
3. Identificar mutaciones y reordenamientos genéticos.
4. En ensayos de RFLP (polimorfismo de longitud de fragmento de restricción)
5. Identificar enfermedades genéticas.
6. Identificar agentes infecciosos.
7. Pruebas de paternidad
8. En huellas dactilares de ADN para identificar criminales.

¿Cómo funciona Southern Blotting

La transferencia Southern implica la separación de fragmentos de ADN según el tamaño mediante electroforesis en gel, transfiriéndolos a una membrana, hibridándolos con una sonda marcada, específica de secuencia, y detectando las bandas marcadas. Los pasos de la transferencia Southern se describen a continuación..

1. Digestión de ADN - La muestra de ADN se digiere mediante enzimas de restricción para obtener fragmentos de ADN, y estos fragmentos se amplifican mediante PCR.
2. Electroforesis en gel: los fragmentos de ADN se fraccionan por tamaño mediante electroforesis en gel.
3. Desnaturalización - El gel con ADN fraccionado se empapa en NaOH o HCl para desnaturalizar el ADN de doble cadena..
4. Secante - Los fragmentos de ADN en el gel se transfieren a una membrana de nailon cargada positivamente mediante un proceso llamado transferencia.
5. Hornear y bloquear - El papel secante con fragmentos de ADN se hornea para fijar el ADN en la membrana. Luego, los sitios de unión desocupados se saturan mediante el tratamiento con albúmina de suero bovino (BSA) o caseína..
6. Hibridación con sondas marcadas. - La membrana unida al ADN se trata con una sonda marcada que contiene una secuencia de nucleótidos complementaria al fragmento de ADN interesado. Las sondas de hibridación generalmente tienen una longitud de 100-500 pb y están marcadas con nucleótidos radiactivos.
7. Visualización por autorradiograma. - La membrana unida a la sonda se visualiza en un autorradiograma para obtener los patrones del fragmento de ADN interesado.

Figura 2: Southern Blotting

Todo el proceso de transferencia de Southern se muestra en Figura 2.

Conclusión

La transferencia de Southern es una técnica de hibridación utilizada en la identificación de secuencias de ADN específicas de una muestra. En este proceso, la muestra de ADN se fracciona mediante enzimas de restricción y la mezcla se procesa en un gel. Luego, el patrón de bandas en el gel se transfiere a una membrana de nylon y se hibrida con una sonda marcada, lo que permite la detección del fragmento interesado..

Referencia:

1. "Southern Blotting". Thermo Fisher Scientific, Disponible aquí.

Imagen de cortesía:

1. “Membrana de transferencia Southern” Por Bojan Žunar - Trabajo propio (CC BY-SA 4.0) a través de Commons Wikimedia
2. “Figure 17 01 05" por CNX OpenStax - (CC BY 4.0) a través de Commons Wikimedia