Diferencia entre Southern Northern y Western Blotting
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los diferencia principal entre Southern Northern y Western Blot es que la La transferencia Southern implica la identificación del ADN, y la transferencia Northern implica la identificación del ARN, mientras que la transferencia Western implica la identificación de proteínas.
Southern, Northern y Western son tres técnicas de transferencia que se utilizan para detectar una molécula de ADN, ARN o proteína específica en una muestra. Durante la transferencia, las macromoléculas se transfieren a una membrana desde el gel y se hacen para unirse con un ácido nucleico o anticuerpo específico que ayuda en la detección.
Áreas clave cubiertas
1. Que es Southern Blotting
- Definición, Proceso, Aplicaciones
2. ¿Qué es Northern Blotting?
- Definición, Proceso, Aplicaciones
3. Que es Western Blotting
- Definición, Proceso, Aplicaciones
4. ¿Cuáles son las similitudes entre Southern Northern y Western Blotting?
- Esquema de características comunes
5. ¿Cuál es la diferencia entre Southern Northern y Western Blotting
- Comparación de diferencias clave
Términos clave
Anticuerpo, ADN, Electroforesis, Northern Blotting, RNA, Proteínas, Southern Blotting, Western Blotting
Que es Southern Blotting
La transferencia Southern es la técnica utilizada para detectar una secuencia específica de ADN en una mezcla de ADN. Los pasos básicos de una transferencia Southern son los siguientes.
Electroforesis - Separa la muestra de ADN en distintas bandas según el tamaño por electroforesis en gel.
Transferir - Durante la transferencia, una membrana de nitrocelulosa se coloca en contacto con el gel y las bandas de ADN se mueven hacia la membrana a través de la acción capilar..
Detección de secuencias específicas. - La secuencia objetivo en la membrana se hibrida con la secuencia de oligonucleótidos marcada específica llamada sonda de hibridación. La sonda de hibridación es corta, molécula de ADN monocatenario de tamaño de 100-500 pb. La rigurosidad, que depende de la temperatura y la concentración de sal del tampón de hibridación, afecta la hibridación. La alta rigurosidad definida por la alta temperatura y la baja concentración de sal aumenta la especificidad de la hibridación, mientras que la baja rigurosidad definida por la baja temperatura y la alta concentración de sal disminuye la especificidad.
Figura 1: Transferencia Southern
El propósito principal de la transferencia de Southern es detectar una secuencia de ADN específica en una muestra. La técnica se utiliza en la toma de huellas dactilares de ADN, pruebas de paternidad, identificación de víctimas e identificación criminal. También ayuda en la identificación de genes específicos, en RFLP (polimorfismo de longitud de fragmento de restricción), mutación e identificación de reordenamiento de genes, enfermedades genéticas y agentes infecciosos..
¿Qué es Northern Blotting?
La transferencia Northern es la técnica utilizada para detectar un ARN específico en una mezcla de ARN. Los pasos básicos de un Northern Blot son los siguientes.
Electroforesis - Separa la muestra de ARN según el tamaño en distintas bandas..
Transferir - Por acción capilar, las bandas de ARN en el gel se transfieren a la membrana.
Detección de secuencias específicas. - La secuencia de ARN diana se detecta por hibridación con una sonda oligonucleotídica marcada formada por ADN.
Figura 2: Transferencia del Norte
Dado que la transferencia Northern puede identificar una secuencia de ARN específica en una muestra, se puede utilizar en los estudios de expresión génica. También puede ayudar en el diagnóstico de enfermedades..
Que es Western Blotting
Western blot es una técnica de transferencia utilizada para detectar una secuencia de aminoácidos específica en una mezcla de proteínas. Los pasos básicos de un Western Blot son los siguientes.
Electroforesis - Las proteínas individuales se separan según el tamaño en bandas por SDS PAGE.
Transferir - Las bandas de proteínas en el gel se transfieren a una membrana mediante transferencia.
Detección de proteínas específicas - La membrana con proteínas separadas se incuba con un anticuerpo primario que solo se une a la proteína específica. Un anticuerpo secundario, que está marcado con una enzima como la peroxidasa de rábano picante (HRP) o fosfatasa alcalina, se utiliza para detectar el anticuerpo primario. Cuando se incuba con el sustrato, la acción de la enzima visualiza la unión de anticuerpos a una región específica en la membrana.
Figura 3: Western Blotting
La transferencia de Western también se llama transferencia de proteínas o inmunotransferencia. Puede identificar la cantidad de proteínas en una muestra, la presencia de bacterias y virus en el suero y la presencia de anticuerpos contra el VIH en el suero. También puede detectar proteínas defectuosas. Además, el Western Blot es la prueba definitiva para la hepatitis B, la enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, la enfermedad de Lyme y el herpes..
Similitudes entre Southern Northern y Western Blotting
- La transferencia Southern, la transferencia Northern y la transferencia Western son tres técnicas de transferencia utilizadas para identificar un tipo particular de macromolécula dentro de una muestra.
- Los tres pasos de las técnicas de transferencia son: electroforesis, transferencia y detección..
- Cada técnica requiere desnaturalización y bloqueo con el exceso, correspondiente macromolécula..
- Cada técnica tiene aplicaciones en biotecnología y medicina..
Diferencia entre Southern Northern y Western Blotting
Definición
La transferencia de Southern se refiere a un procedimiento para identificar secuencias específicas de ADN, mientras que la transferencia de Northern se refiere a una adaptación del procedimiento de transferencia de Southern utilizado para detectar secuencias específicas de ARN mediante hibridación con el ADN complementario y la transferencia de Western se refiere a un procedimiento de transferencia utilizado para identificar amino específico -las secuencias ácidas en proteínas.
Desarrollado por
La transferencia de Southern fue desarrollada por Edward M. Southern en 1975. La transferencia de Northern fue desarrollada por Alwine y sus colegas en 1979, y la transferencia de Western fue desarrollada por el grupo de George Stark en la Universidad de Stanford en 1979.
Molécula detectada
La transferencia Southern detecta secuencias de ADN específicas, la transferencia Northern detecta secuencias de ARN específicas, mientras que la transferencia Western detecta proteínas específicas.
Electroforesis en gel
La transferencia Southern implica electroforesis en gel de agarosa y la transferencia Northern implica gel de agarosa formaldehído desnaturalizante, mientras que la transferencia Western incluye SDS PAGE.
Método de transferencia
Tanto la transferencia Southern como la Northern incluyen transferencia capilar, mientras que la transferencia Western implica una transferencia eléctrica.
Sondas
La transferencia Southern utiliza sondas de ADN, mientras que la transferencia Northern usa sondas de ADNc y la transferencia Western utiliza anticuerpos primarios y secundarios.
Solicitud
La transferencia de Southern se utiliza para identificar secuencias de genes específicos y en la identificación del ADN. La transferencia Northern se usa en el análisis de la expresión génica, y la transferencia Western se usa en el diagnóstico de la enfermedad.
Conclusión
La transferencia Southern identifica la secuencia de ADN específica, mientras que la transferencia Northern identifica la secuencia de ARN específica y la transferencia Western identifica la secuencia de proteína específica en una muestra. Por lo tanto, la principal diferencia entre las tres técnicas de transferencia es el tipo de macromolécula que detectan..
Referencia:
1. “Southern Blotting: Principio, procedimiento y aplicación -.” NOTAS DE BIOLOGÍA EN LÍNEA, 4 de diciembre de 2017, disponible aquí
2. Kochunni, Deena T y Jazir Haneef. "Northern Blotting: Principio, procedimiento y aplicaciones". Exámenes de biología 4 U, disponibles aquí
3. "Técnica de Western Blot: principio, procedimiento y aplicación -". NOTAS DE BIOLOGÍA EN LÍNEA, 4 de diciembre de 2017, disponible aquí
Imagen de cortesía:
1. “Figure 17 01 05" Por CNX OpenStax - (CC BY 4.0) a través de Commons Wikimedia
2. “Northern blot diagram” por Ilewieszoośmiornicach - Trabajo propio (CC BY-SA 4.0) a través de Commons Wikimedia
3. "Western Blotting" Por Cawang - Trabajo propio (CC0) a través de Commons Wikimedia
