Diferencia entre la ligasa T4 y T7 ADN

Diferencia clave - T4 vs T7 DNA Ligase
 

La ADN ligasa es una enzima importante utilizada en las técnicas de biología molecular. Funciona como un pegamento molecular para unir nucleótidos formando enlaces fosfodiéster entre nucleótidos. Los enlaces fosfodiéster se forman entre el extremo hidroxilo 3 'del resto azúcar y el grupo fosfato del extremo 5'. La ADN ligasa es vital en el proceso de replicación para unir los fragmentos Okazaki de la hebra retrasada y durante los mecanismos de reparación del ADN y in vitro experimentos de clonación para unir el gen deseado de interés para el genoma del vector. Hay dos ligasas de ADN principales utilizadas actualmente por los biólogos moleculares: las ligasas de ADN T4 y T7. La ADN ligasa de T4 es una de las primeras enzimas en aislarse del bacteriófago T4. La ADN ligasa de T7, que es una proteína más pequeña, es una enzima aislada del bacteriófago T7. Esta es la diferencia clave entre las ligasas de ADN T4 y T7..

CONTENIDO

1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Cuál es la acción de la ADN ligasa?
3. ¿Qué es la ligasa T4 ADN?
4. ¿Qué es la ADN ligasa de T7?
4. Similitudes entre la ligasa T4 y T7 ADN
5. Comparación lado a lado - ADN ligasa T4 frente a T7 en forma tabular
6. Resumen

¿Cuál es la acción de la ADN ligasa??

La ligadura del ADN se produce en una reacción de tres pasos. El primer paso es un ataque nucleofílico en el alfa-fósforo de ATP que genera un intermedio de enzima adenilato covalente en el que el AMP está vinculado al nitrógeno de la cadena lateral terminal de la lisina. En el segundo paso, se produce un ataque nucleófilo en el fósforo de la enzima-adenilato por el sustrato de ADN terminado en 5'-fosfato, liberando lisina y formando adenilato de ADN. En el paso final, el adenilato de ADN es atacado por 3'-OH de otra cadena de ADN, liberando AMP y uniéndose a los polinucleótidos.

¿Qué es la ligasa T4 ADN??

La ligasa T4 fue la primera ligasa que se aisló e identificó por Meselson, Weigle y Kellenberger, y fue la primera ligasa comercial producida. T4 ADN ligasa es una enzima dependiente de ATP que cataliza la formación de enlaces fosfodiéster. Es una cadena polipeptídica única con 487 residuos de aminoácidos y tiene un peso molecular de aproximadamente 77 kDa. El pH óptimo para su actividad se encuentra en el rango de 7.5 - 8..

Figura 01: Ligasa de ADN T4

La ADN ligasa de T4, como su nombre indica, está presente en el bacteriófago T4 y se aisló cuando el fago produjo la enzima en la infección con -E. coli. La enzima une dúplex de ADN de doble cadena con extremos romos y los fragmentos que deben unirse deben estar muy cerca unos de otros.

¿Qué es la ADN ligasa de T7??

La ligasa T7 es una proteína de 41 kDa producida por el bacteriófago T7 y se aísla mediante la infección E. coli Células. La función principal de la ligasa T7 es ligar los dúplex de ADN a través de enlaces fosfodiéster y unir fragmentos cercanos de ADN durante los experimentos de clonación. El pH óptimo para la ADN ligasa de T7 se encuentra en el rango de 7,0 a 7,2. La ligasa T7 es dependiente de ATP. Las ADN ligasas de T7 también son capaces de recocer híbridos de ADN y ARN, dando lugar a conformaciones anormales durante la transcripción; Sin embargo, este fenómeno todavía está siendo investigado por in vitro estudios.

¿Cuáles son las similitudes entre la ADN ligasa T4 y T7??

• T4 y T7 DNA Ligase participan en una reacción de ligación al recocer los dúplex de ADN a través de la formación de enlaces fosfodiéster entre el extremo 3 'OH y el extremo 5' fosfato del fragmento de DNA.
• Ambas enzimas ligan dúplex de ADN con extremos romos que están muy cerca unos de otros.
• Ambas enzimas son dependientes de ATP.
• Estas enzimas son aisladas infectando E. coli células con el bacteriófago particular.
• Las aplicaciones de ambas enzimas incluyen:
  • Clonación molecular - para ligar el gen de interés para el vector
  • Reparación de ADN - para reparar nichos de doble cadena
  • Replicación in vitro de ADN
  • Reacción en cadena de la ligasa

¿Cuál es la diferencia entre la ADN ligasa T4 y T7??

T4 vs T7 DNA Ligase
T4 ADN Tipo de ligasa ADN ligasa aislada del bacteriófago T4 y participa en la ligadura de fragmentos de ADN adyacentes a través de la formación de enlaces fosfodiéster.	T7 ADN Tipo de ligasa ADN ligasa aislada del bacteriófago T7 y participa en la ligadura de fragmentos de ADN adyacentes a través de la formación de enlaces fosfodiéster.
Tamaño de la proteína
El tamaño de la ADN ligasa T4 es de 77 kDa, más grande en comparación con la ADN ligasa T7.	El tamaño de la ADN ligasa T7 es de 41 kDa..
PH óptimo
El rango de pH que funciona con la ADN ligasa de T4 es 7.5 - 8.0.	El rango de pH que funciona con la ADN ligasa de T7 es 7.0 - 7.2.

Resumen - T4 vs T7 DNA Ligase

Las ligasas de ADN son una clase importante de enzimas involucradas en la clonación molecular para producir moléculas de ADN recombinante que contienen el gen de interés. La reacción de ligación es una reacción que utiliza energía y hay nuevos estudios de investigación en curso para mejorar la precisión a través de la modulación de las ligasas disponibles. Las ADN ligasas T4 y T7 son dos tipos de enzimas ADN ligasa importantes que se utilizan en las técnicas de biología molecular. La ADN ligasa de T7 es también el resultado de una investigación que se basó en la ligasa primaria aislada de T4 infectada E. coli. T7 se retrata más eficiencia y precisión en el desempeño de su función debido a su tamaño más pequeño. Esta es la diferencia entre T4 y T7 ligasa..

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Referencias:

1. “DNA Ligase, T4.” DNA Ligase, T4 - Manual de enzimas Worthington, Disponible aquí. Consultado el 22 de agosto de 2017.
2. Doherty, Aidan J., et al. "Bacteriófago T7 ADN Ligasa OVEREXPRESIÓN, PURIFICACIÓN, CRISTALIZACIÓN Y CARACTERIZACIÓN". Journal of Biological Chemistry, 10 de mayo de 1996, Disponible aquí. Consultado el 22 de agosto de 2017.

Imagen de cortesía:

1. “Figura 3. Ligadura Ligasa Ligasa de ADN de ARNm T4 de hebra sencilla. (CC BY 3.0) vía Commons Wikimedia