Diferencia entre RT PCR y QPCR

Diferencia Clave - RT PCR vs QPCR
 

La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica utilizada para amplificar una región específica del ADN. in vitro. Debido a la invención de esta técnica por Kary Mullis en 1983, los científicos pueden hacer entre mil y millones de copias de fragmentos de ADN específicos para fines de investigación. Actualmente, se ha convertido en una técnica común y rutinaria en laboratorios clínicos y de investigación para una amplia variedad de aplicaciones. Existen variaciones de la técnica de PCR tradicional, como la RT PCR, la PCR anidada, la PCR multiplexada, la PCR Q, la RT - QPCR, etc. La PCR RT y la PCR Q son dos variaciones importantes de la PCR. La diferencia clave entre RT PCR y Q PCR es que RT PCR se utiliza para detectar la expresión génica a través de la creación deADN complementario (cDNA) transcripciones de RNA mientras Q PCR se utiliza para medir cuantitativamente los productos de PCR en tiempo real utilizando tintes fluorescentes.

CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es RT PCR?
3. Qué es QPCR
4. Comparación lado a lado - RT PCR vs QPCR
5. Resumen

¿Qué es RT PCR??

La reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT PCR) es una variante de la PCR que se utiliza para detectar la expresión de ARN. Es un método muy importante para detectar la expresión de ARNm en tejidos. RT PCR se emplea cuando el material de partida de la muestra es ARN. En RT PCR, el mRNA de la plantilla se convierte primero en ADN complementario. Este paso es catalizado por la enzima transcriptasa inversa y el proceso se conoce como transcripción inversa. En segundo lugar, la PCR tradicional se emplea para el ADNc recién sintetizado para la amplificación.

La RT PCR es una técnica altamente sensible que requiere una cantidad relativamente pequeña de muestra de ARN. RT PCR se usa comúnmente en el diagnóstico y la cuantificación de las especies de ARN, especialmente los virus de ARN como el virus de inmunodeficiencia humana y el virus de la hepatitis C.

Figura 01: Técnica de RT PCR

Qué es QPCR?

La PCR cuantitativa (QPCR) es una variante de la PCR que se utiliza para medir cuantitativamente los productos de la PCR. También se le conoce como reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, ya que mide la amplificación del tiempo real utilizando una máquina de PCR en tiempo real. Es un método adecuado para determinar la cantidad de una secuencia diana o gen presente en una muestra. La característica interesante de QPCR es que combina la amplificación y la verdadera cuantificación en un solo paso. Por lo tanto, la necesidad de electroforesis en gel en la detección puede eliminarse mediante la técnica QPCR. QPCR usa tintes fluorescentes para marcar los productos de PCR durante las reacciones de PCR que eventualmente conducen a una cuantificación directa. Cuando los productos de la PCR se acumulan, las señales fluorescentes también se acumulan y serán medidas por la máquina en tiempo real. QPCR se puede combinar con RT PCR. Se conoce como RT-QPCR o QRT-PCR y se considera como el método más poderoso, sensible y cuantitativo para la detección de los niveles de ARN en las células o tejidos..

SYBR Green y Taqman son dos métodos empleados para detectar o observar el proceso de amplificación de la PCR en tiempo real. El método SYBR Green se lleva a cabo utilizando un tinte fluorescente llamado SYBR green y detecta la amplificación al unir el tinte para producir ADN de doble cadena. Taqman se lleva a cabo utilizando sondas de doble etiquetado y detecta la amplificación por degradación de la sonda por la polimerasa Taq y las liberaciones del fluoróforo como se muestra en la figura 02. Ambos métodos monitorean el progreso del proceso de amplificación e informan la cantidad del producto en tiempo real.

La PCR en tiempo real tiene una amplia variedad de aplicaciones, como la cuantificación de la expresión génica, el análisis de ARN no codificante y microARN, el genotipado de SNP, la detección de variantes del número de copias, la detección de mutaciones raras, la detección de organismos modificados genéticamente, la detección de agentes infecciosos, etc..

Figura 02: técnica de PCR cuantitativa

¿Cuál es la diferencia entre RT PCR y QPCR??

RT PCR vs QPCR
RT PCR es una técnica utilizada para detectar la expresión génica por amplificación.	QPCR es una técnica que amplifica el ADN y cuantifica los productos de PCR en tiempo real..
Afectación de la enzima transcriptasa inversa
La enzima transcriptasa inversa se utiliza para RT PCR.	La enzima transcriptasa inversa no se usa para la QPCR.
Uso de moléculas marcadas por fluorescencia
Los tintes o sondas marcados por fluorescencia no se utilizan para RT PCR.	Para la QPCR se utilizan tintes o sondas marcados con fluorescencia..
Cuantificación de producto de PCR
A menos que junto con QPCR, RT PCR no cuantifica el producto de PCR.	QPCR mide cuantitativamente el producto de PCR.
Material de partida
El material de partida es ARNm.	El material de partida es el ADN..
Síntesis del ADNc
El ADN complementario se produce durante la RT PCR..	El ADN complementario no se produce durante la QPCR.

Resumen - RT PCR vs QPCR

RT PCR y QPCR son dos versiones de PCR tradicional. La técnica de RT PCR se realiza para muestras de ARNm y se controla mediante la transcripción inversa y la producción de ADNc. QPCR se utiliza para cuantificar los productos de PCR durante los ciclos térmicos de PCR en tiempo real utilizando tintes fluorescentes o sondas marcadas. En QPCR, la cantidad de producto de PCR está representada por las señales fluorescentes emitidas por la muestra. RT PCR se usa popularmente como un proceso de amplificación, mientras que QPCR se usa comúnmente como un proceso de cuantificación. Esta es la diferencia entre RT PCR y QPCR.

Referencias:
1. Deepak, SA, KR Kottapalli, R. Rakwal, G. Oros, KS Rangappa, H. Iwahashi, Y. Masuo y GK Agrawal. "PCR en tiempo real: Revolucionando la detección y el análisis de expresión de genes". Genómica actual. Bentham Science Publishers Ltd., junio de 2007. Web. 03 abr. 2017
2. Zeka, Fjoralba, Katrien Vanderheyden, Els De Smet, Claude A. Cuvelier, Pieter Mestdagh y Jo Vandesompele. “Análisis de expresión génica basado en RT-qPCR directo y sensible de muestras de FFPE”. Nature News. Nature Publishing Group, 22 de febrero de 2016. Web. 03 abr. 2017
3. Overbergh, L., A. Giulietti, D. Valckx, B. Decallonne, R. Bouillon y C. Mathieu. “El uso de la PCR con transcriptasa inversa en tiempo real para la cuantificación de la expresión génica de citoquinas”. Journal of Biomolecular Techniques: JBT. La Asociación de Instalaciones de Recursos Biomoleculares, marzo de 2003. Web. 03 abr. 2017

Imagen de cortesía:
1. "Taqman" por usuario: Braindamaged - Trabajo propio del cargador original (dominio público) a través de Commons Wikimedia
2. “Reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa” por Jpark623 - Trabajo propio (CC BY-SA 3.0) vía Commons Wikimedia