Diferencia entre Northern Southern y Western Blotting

Diferencia clave: Northern vs Southern vs Western Blotting
 

La detección de secuencias específicas de ADN, ARN y proteínas es esencial para varios tipos de estudios en biología Molecular. La electroforesis en gel es una técnica que separa el ADN, el ARN y las proteínas de acuerdo con sus tamaños. A partir de los perfiles de gel, las secuencias especiales de ADN, secuencia de ARN o proteína se detectan mediante las técnicas especiales denominadas transferencia e hibridación con sondas marcadas. Hay tres tipos diferentes de métodos de transferencia: el sur, el norte y el oeste. La diferencia clave entre el norte de Southern y el western blotting reside en el tipo de molécula que detecta en una muestra. La transferencia de Southern es un método que detecta una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN. La transferencia Northern es una técnica que detecta una secuencia de ARN específica de una muestra de ARN. Western Blot es un método que detecta una proteína específica de una muestra de proteína..

CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. Que es Southern Blotting
3. ¿Qué es Northern Blotting?
4. Que es Western Blotting
5. Comparación lado a lado - Northern vs Southern vs Western Blotting
6. Resumen

Que es Southern Blotting?

La técnica de transferencia Southern fue desarrollada por E. M. Southern en 1975 para la identificación de una secuencia de ADN específica a partir de una muestra de ADN. Esta es la primera técnica de transferencia introducida en biología molecular. Permitió la detección de genes específicos del ADN, fragmentos específicos del ADN, etc. Hay varios pasos involucrados en la técnica de transferencia del sur. Son los siguientes.

1. El ADN se aísla de la muestra y se digiere con endonucleasas de restricción..
2. La muestra digerida se separa mediante electroforesis en gel de agarosa..
3. Los fragmentos de ADN en el gel se desnaturalizan en cadenas simples mediante el uso de una solución alcalina.
4. El ADN monocatenario se transfiere a una membrana de filtro de nitrocelulosa por transferencia capilar.
5. El ADN transferido se fija en la membrana de forma permanente.
6. El ADN fijo en la membrana se hibrida con sondas marcadas.
7. El ADN no unido se lava de la membrana por lavado.
8. La película de rayos X se expone a la membrana y se prepara una autorradiografía..

La transferencia de Southern se aplica para diferentes aspectos de la biología molecular. Es útil en el mapeo de RFLP, estudios forenses, metilación de ADN en la expresión de genes, detección de genes mutados en trastornos genéticos, huellas de ADN, etc..

Figura 01: Técnica de Southern Blotting

¿Qué es Northern Blotting??

Northern blotting es un método diseñado para detectar una secuencia de ARN específica o una secuencia de ARNm de una muestra para estudiar la expresión génica. Esta técnica fue desarrollada por Alwine, Kemp y Stark en 1979. Se diferencia de las técnicas de transferencia Western y Western debido a varios pasos. Sin embargo, esta técnica también se realiza mediante electroforesis en gel, transferencia e hibridación con sondas marcadas específicas y detección. La técnica de Northern blot se realiza de la siguiente manera.

1. El ARN se extrae de la muestra y se separa por electroforesis en gel..
2. El ARN se transfiere del gel a una membrana de transferencia y se fija.
3. La membrana se trata con una sonda marcada preparada a partir de ADNc o ARN (la sonda es complementaria de una secuencia específica en la muestra).
4. La sonda se incuba con la membrana para unirse con una secuencia específica..
5. Las sondas sin unir se lavan.
6. Los fragmentos hibridados son detectados por una autorradiografía..

Northern blotting es una herramienta importante en la detección y cuantificación de ARNm hibridado, el estudio de la degradación del ARN, la evaluación de la vida media del ARN, la detección de corte y empalme del ARN, el estudio de la expresión génica, etc..

Figura 02: Transferencia Northern

Que es Western Blotting?

Western blotting es un método para detectar una proteína específica de una mezcla de proteínas mediante el uso de un anticuerpo marcado. Por lo tanto, Western Blot también se conoce como inmunotransferencia. Esta técnica fue introducida por Towbin. et al en 1979 y ahora se realiza de forma rutinaria en los laboratorios para el análisis de proteínas. Los pasos son los siguientes.

1. Las proteínas se extraen de la muestra.
2. Las proteínas se separan por sus tamaños utilizando electroforesis en gel de poliacrilamida
3. Las moléculas separadas se transfieren a una membrana de PVDF o membrana de nitrocelulosa por electroporación
4. La membrana está bloqueada por la unión no específica con los anticuerpos.
5. Las proteínas transferidas se unen con el anticuerpo primario (anticuerpos marcados con enzimas).
6. La membrana se lava para eliminar los anticuerpos primarios no específicamente unidos.
7. Los anticuerpos unidos se detectan agregando un sustrato y detectando el precipitado coloreado formado

La transferencia de Western es útil en la detección de anticuerpos anti-VIH en una muestra de suero humano. El Western blot también se puede usar como prueba confirmatoria de la infección por Hepatitis B y prueba definitiva para la enfermedad de las vacas locas.

Figura 03: Western Blotting

¿Cuál es la diferencia entre Northern Southern y Western Blotting??

Northern vs Southern vs Western Blotting
Tipo de Molécula Detectada
Transferencia del norte	La transferencia Northern detecta una secuencia de ARN específica de una muestra de ARN.
Southern Blotting	La transferencia de Southern detecta una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN.
Western Blot	La transferencia de Western detecta una proteína específica de una muestra de proteína.
Tipo de gel
Transferencia del norte	Esto utiliza gel de agarosa / formaldehído..
Southern Blotting	Esto utiliza un gel de agarosa..
Western Blot	Esto utiliza gel de poliacrilamida..
Método de transferencia
Transferencia del norte	Esta es una transferencia capilar..
Southern Blotting	Esta es una transferencia capilar..
Western Blot	Esta es una transferencia eléctrica..
Sondas utilizadas
Transferencia del norte	Sondas de ADNc o ARN marcadas de forma radioactiva o no radiactiva.
Southern Blotting	Las sondas de ADN se marcan de forma radioactiva o no radioactiva.
Western Blot	Los anticuerpos primarios se utilizan como sondas..
Sistema de detección
Transferencia del norte	Esto se hace usando una autorradiografía, o detección de luz o cambio de color..
Southern Blotting	Esto se hace usando una autorradiografía, detección de luz o cambio de color..
Western Blot	Esto se hace mediante la detección de luz o cambio de color..

Resumen - Northern vs Southern vs Western Blotting

La transferencia es una técnica especial desarrollada para la identificación de ADN, ARN o proteína específicos de las muestras. Hay tres procedimientos de transferencia separados, a saber, el norte, el sur y el oeste, para detectar un tipo específico de molécula. La técnica de transferencia Northern está diseñada para detectar una secuencia de ARN específica de una mezcla de ARN. La técnica de transferencia de Southern permite la detección de una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN y la técnica de transferencia de western se desarrolla para identificar una proteína específica de una mezcla de proteínas.

Referencias
1. Gibbons, Janay. "Western Blot: Resumen de transferencia de proteínas". North American Journal of Medical Sciences. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, marzo de 2014. Web. 27 de marzo de 2017
2. Brown, T. "Southern blotting". Protocolos actuales en inmunología. Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU., Mayo de 2001. Web. 27 de marzo de 2017
3. Él, Shan L. "Northern blot". Métodos en enzimología. Biblioteca Nacional de Medicina de los Estados Unidos, 2013. Web. 27 de marzo de 2017

Imagen de cortesía:
1. “Northern Blot Scheme” por RNA405 - Trabajo propio (dominio público) a través de Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" Por Amanthabagdon - Trabajo propio (Dominio público) a través de Commons Wikimedia