Diferencia entre Nick Translation y Primer Extension

Diferencia clave: Nick Translation vs Primer Extension
 

La traducción de Nick y la extensión de la cartilla son dos técnicas importantes realizadas en biología molecular. La diferencia clave entre la traducción de nick y la extensión de primer es que El proceso de traducción de nick produce sondas etiquetadas para otras técnicas de hibridación. mientras El método de extensión del cebador identifica una secuencia de ARN específica de una mezcla y revela información sobre la expresión del ARNm. Ambas técnicas tienen una gran importancia y se realizan de forma rutinaria en laboratorios de investigación molecular..

CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es la traducción de Nick?
3. Qué es Primer Extension
4. Comparación lado a lado - Nick Translation vs Primer Extension
5. Resumen

¿Qué es la traducción de Nick??

La traducción de Nick es una técnica importante que se utiliza para preparar sondas marcadas para diversas técnicas de biología molecular, como la transferencia, en el lugar hibridación, fluorescente en el lugar Hibridación etc. Es una in vitro Método de marcaje del ADN. Las sondas de ADN se utilizan para identificar secuencias específicas de ADN o ARN. Con la ayuda de una sonda marcada, se pueden marcar o visualizar fragmentos específicos de una mezcla compleja de ácido nucleico. Por lo tanto, las sondas marcadas se preparan utilizando diversas técnicas para diferentes técnicas. La traducción de Nick es uno de esos métodos que produce sondas marcadas con la ayuda de las enzimas ADNasa 1 y ADN polimerasa 1.

El proceso de traducción de la mella comienza con la actividad de la enzima ADNasa 1. La DNasa 1 introduce mellas en el esqueleto de fosfato del ADN bicatenario al dividir los enlaces fosfodiéster entre los nucleótidos. Una vez que se crea el nick, se liberará el grupo 3 'OH del nucleótido y la enzima ADN polimerasa 1 actuará sobre él. La actividad exonucleasa de 5 'a 3' de la ADN polimerasa 1 elimina los nucleótidos de la muesca hacia la dirección 3 'de la cadena de ADN. Simultáneamente, la actividad polimerasa de la enzima ADN polimerasa 1 funciona y agrega nucleótidos para reemplazar los nucleótidos eliminados. Si los nucleótidos se etiquetaron, la sustitución se realizará por los nucleótidos marcados y marcará el ADN para su identificación. Este ADN marcado recién sintetizado se puede usar como sondas en varias reacciones de hibridación en Biología Molecular.

Figura 01: proceso de traducción de Nick

Qué es Primer Extension?

La extensión del cebador es una técnica que se utiliza para encontrar una secuencia de ARN específica a partir de una mezcla de ARN y ubicar el extremo 5 'de la transcripción del ARNm. También se utiliza para estudiar la estructura del ARN y la expresión. El método de extensión del cebador se lleva a cabo con cebadores marcados o con nucleótidos marcados. Si se utilizan cebadores marcados, se excluye la necesidad de marcar los nucleótidos que se utilizan para la síntesis de ADNc. Hay varios pasos en esta técnica. Comienza con la extracción de ARN de la muestra. Luego, se agrega un cebador oligonucleótido marcado a la mezcla junto con los ingredientes necesarios para sintetizar el ADNc de una secuencia de ARN específica. Primer recocido con la secuencia complementaria de la mezcla. Usando la secuencia recocida de cebador como plantilla, la enzima transcriptasa inversa sintetiza el ADN complementario (ADNc) de la secuencia de ARN. El recocido de cebadores y la transcripción inversa ocurren solo cuando la secuencia de ARN específica está presente en la muestra. Finalmente, cuando se realiza una electroforesis en gel desnaturalizante, se puede determinar el tamaño de la secuencia de ARN. También es fácil encontrar la base +1 de la secuencia del ARNm (sitio de inicio de la transcripción) mediante el método de extensión del cebador. La cantidad de ARNm presente en la muestra se puede cuantificar por este método si se usa un cebador en exceso.

Figura 02: Extensión del cebador

¿Cuál es la diferencia entre Nick Translation y Primer Extension??

Nick Translation vs Primer Extension
La traducción de Nick es un proceso que crea sondas de ADN marcadas para varias reacciones de hibridación.	La extensión de cebadores es una técnica utilizada para encontrar un ARN específico o para estudiar la expresión génica.
Enzimas utilizadas
Se utilizan enzimas ADNasa 1 y ADNasa 1.	Se utiliza la enzima transcriptasa inversa.
Importancia
La traducción de Nick facilita el marcado de una secuencia de ADN específica.	La extensión del cebador permite la detección del tamaño de secuencia del ARNm específico y la cantidad presente en la muestra.

Resumen - Nick Translation vs Primer Extension

La traducción de Nick es un método utilizado para sintetizar sondas marcadas en función de las actividades de la DNasa 1 y E. coli ADN polimerasa 1 enzimas. Es un in vitro Método empleado en los laboratorios antes de las diferentes técnicas de hibridación. Durante la traducción de la mella, la actividad de exonucleasa 5'-3 'de la ADN polimerasa 1 elimina los nucleótidos por delante de la mella y la actividad de la polimerasa de la ADN polimerasa 1 reemplaza los nucleótidos eliminados por nucleótidos marcados por detrás de la mella. La extensión del cebador es un método que se utiliza para detectar un transcrito de ARN específico de una mezcla y cuantificar el tamaño y la cantidad del ARN de interés. Esta es la diferencia entre la traducción de nick y la extensión de primer..

Referencias
1. Reid, Alex. "Nick Traducción". Springer. N.p., n.d. Web. 18 de abril de 2017
2. "Extensión de imprimación". Diagnóstico nacional. N.p., n.d. Web. 19 de abril de 2017
3. Kuo, M. T., y W. Plunkett. “Nick-traducción de cromosomas en metafase: etiquetado in vitro de regiones hipersensibles a las nucleasas en los cromosomas”. Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU., Febrero de 1985. Web. 19 de abril de 2017
4. Raymond et al. "Ensayo de PCR de extensión de cebador simple y cuantitativo para el monitoreo directo de microARN y ARN de interferencia corta". ARN. Copyright 2005 por la RNA Society, noviembre de 2005. Web. 19 de abril de 2017

Imagen de cortesía:
1. "Ensayo de extensión de cebadores" por Jjnmmnjj - Trabajo propio (CC BY-SA 3.0) vía Commons Wikimedia