Diferencia entre la inmunofluorescencia y la inmunohistoquímica

Diferencia clave - Inmunofluorescencia vs inmunohistoquímica
 

El diagnóstico de enfermedades, que utiliza métodos de biología molecular, se ha convertido en un área emergente de la tecnología de laboratorio clínico. Incluye todas las pruebas y métodos para identificar una enfermedad y comprender la causa de una enfermedad mediante el análisis de ADN, ARN o proteínas expresadas en un organismo. Los rápidos avances en el diagnóstico molecular han permitido la investigación básica sobre enfermedades transmisibles y no transmisibles. Estos se utilizan para determinar cambios en la secuencia o niveles de expresión en genes o proteínas cruciales involucrados en la enfermedad. La inmunofluorescencia (IF) y la inmunohistoquímica (IHC) son dos de estas técnicas ampliamente utilizadas en biología del cáncer.. IF es un tipo de IHC en el que se utiliza un método de detección de fluorescencia para analizar anticuerpos monoclonales y policlonales, mientras que IHC utiliza métodos químicos para detectar los anticuerpos monoclonales y policlonales. Esta es la diferencia clave entre IF y IHC.

CONTENIDO

1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es la inmunofluorescencia? 
3. ¿Qué es la inmunohistoquímica?
4. Similitudes entre la inmunofluorescencia y la inmunohistoquímica
5. Comparación lado a lado: inmunofluorescencia versus inmunohistoquímica en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la inmunofluorescencia (IF)??

La inmunofluorescencia es una técnica de detección en la que los anticuerpos utilizados en el ensayo se marcan con tintes fluorescentes o proteínas fluorescentes para el propósito de detección. Los anticuerpos secundarios etiquetados pueden dar como resultado señales de fondo no deseadas; por lo tanto, la técnica de IF se basa en el etiquetado del propio anticuerpo primario en la actualidad para evitar señales no deseadas durante la detección. A través de esta técnica, se evita la unión no específica entre el anticuerpo primario y el secundario, y es más rápida ya que no hay un paso secundario de incubación involucrado. También se mejora la calidad de los datos..

Figura 01: Tinción doble de inmunofluorescencia para BrdU, NeuN y GFAP

Los fluorocromos o colorantes fluorescentes son compuestos que pueden absorber radiación, preferiblemente radiación ultravioleta que se excita. Cuando las partículas alcanzan el estado fundamental desde el estado excitado, emiten radiación que es captada y detectada por un detector para formar un espectro. Es de gran importancia que la etiqueta fluorescente sea compatible y estable para la reacción particular y se debe conjugar correctamente con el anticuerpo para obtener resultados precisos. Uno de los fluorocromos más utilizados es el isotiocianato de fluoresceína (FITC), que es de color verde, con longitudes de onda de absorción y emisión máxima de 490 nm y 520 nm, respectivamente. La rodamina, otro agente utilizado en IF, es de color rojo y tiene distintas longitudes de onda de absorción y emisión de 553 nm y 627 nm.

Qué es la inmunohistoquímica (IHC)?

La IHC es un método de prueba molecular practicado para identificar y confirmar la presencia del antígeno en la célula diana. La célula diana podría ser una partícula infecciosa, un patógeno microbiano o una célula tumoral maligna. IHC utiliza anticuerpos monoclonales y policlonales para determinar la presencia de antígenos presentes en la superficie celular de las células diana. La técnica se basa en la unión antígeno-anticuerpo. Un marcador de detección se conjuga con estos anticuerpos para detectar la presencia o ausencia del antígeno particular. Estos marcadores pueden ser marcadores químicos como enzimas, anticuerpos marcados con fluorescencia o anticuerpos radiomarcados.

Figura 02: Corte de cerebro de ratón teñida por inmunohistoquímica.

La aplicación más popular de IHC es en la biología celular del cáncer para identificar la presencia de tumores malignos, pero también se usa para la detección de enfermedades infecciosas..

Cuáles son las similitudes entre la inmunofluorescencia y la inmunohistoquímica?

• La inmunofluorescencia y la inmunohistoquímica tienen lugar bajo condiciones in vitro.
• Ambas técnicas se basan en el antígeno-anticuerpo.
• Ambas son técnicas muy rápidas..
• Los resultados de las técnicas son reproducibles..
• Ambos han mejorado la calidad de los datos..
• Estas técnicas utilizadas en el diagnóstico de cáncer y enfermedades infecciosas..

¿Cuál es la diferencia entre la inmunofluorescencia y la inmunohistoquímica??

Inmunofluorescencia vs inmunohistoquímica
IF es una técnica de detección en la que los anticuerpos utilizados en el ensayo se marcan utilizando tintes fluorescentes o proteínas fluorescentes para la detección.	IHC es una técnica de detección en la que los anticuerpos utilizados en el ensayo se marcan con productos químicos o elementos radiactivos para la detección.
Exactitud
La precisión es mayor en la técnica de FI en comparación con la IHC.	La precisión es menor en IHC.
Especificidad
IF es más específico.	IHC es menos específico.

Resumen - Inmunofluorescencia vs inmunohistoquímica

Los mecanismos moleculares han provocado muchos cambios en el campo de la medicina, dando lugar a métodos avanzados de pruebas moleculares que han provocado revoluciones en el campo de los diagnósticos. Estas invenciones han conducido a una identificación y confirmación rápida y precisa de la enfermedad, permitiendo así la administración y producción exitosa de medicamentos. Estas técnicas también se utilizan en farmacología para encontrar los objetivos de los fármacos y confirmar las propiedades farmacocinéticas del fármaco durante el metabolismo del fármaco. IF y IHC son dos métodos de diagnóstico que se basan en el concepto de unión de antígeno y anticuerpo, aunque el modo de detección en ambas técnicas difiere. IF utiliza el principio de fluorescencia para detectar el antígeno e IHC utiliza el concepto de conjugación química para detectar el antígeno. Esta es la diferencia entre IF y IHC.

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Referencias:

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2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Aplicaciones de la inmunohistoquímica". Revista de Farmacia y Ciencias Biológicas, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, agosto de 2012, Disponible aquí. Consultado el 25 de agosto de 2017.

Imagen de cortesía:

1. "Doble tinción de inmunofluorescencia para BrdU, NeuN y GFAP" Por Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2do, Liu X. - Administración intranasal del factor de crecimiento transformante beta1 en ratones después de un accidente cerebrovascular reduce el volumen del infarto y aumenta la neurogénesis en la zona subventricular; PMID 19077183 (CC BY 2.0) vía Commons Wikimedia
2. "Hipotálamo de un tejido de ratón teñido por ABC-inmunohistoquímica" Por zabbn - Trabajo propio (CC BY-SA 3.0) vía Commons Wikimedia