La clonación de ADN es un proceso importante que permite la propagación de importantes fragmentos de ADN de organismos. Requiere la unión de un ADN específico con un vector de ADN para crear un ADN recombinante que se transforma en el organismo huésped. Un vector es una molécula de ADN que se comporta como un vehículo para transportar material genético extraño a otra célula u organismo. Debe ser capaz de replicarse dentro del organismo huésped y producir múltiples copias de ADN recombinante. Hay diferentes tipos de vectores utilizados en la clonación de ADN. El cromosoma artificial de levadura (YAC) y el fago M13 son dos tipos entre ellos. La diferencia clave entre el vector de fagos YAC y M13 es que YAC es un cromosoma artificial que se replica en células de levadura. mientras El vector fago M13 es un ADN circular monocatenario del bacteriófago M13 que se replica en E. coli Células.
CONTENIDO
1. Resumen y diferencia clave
2. Que es yac
3. ¿Qué es el fago M13?
4. Comparación lado a lado - YAC vs M13 Phage Vector
5. Resumen
YAC es un cromosoma construido artificialmente que tiene la capacidad de transportar un gran segmento de ADN extraño y replicarse dentro de las células de levadura. Tiene centrómero, telómero y secuencias de replicación autónoma, esenciales para la replicación y la estabilidad. YAC también debe llevar un marcador selectivo o marcadores y sitios de restricción para convertirlo en un vector de clonación efectivo. Las secuencias grandes que van desde 1000 kb a 2000 kb pueden insertarse en YAC y transferirse a levadura.
Figura 01: Vector YAC
El bacteriófago M13 es un virus que infecta y se replica en E. coli. El genoma del bacteriófago M13 es de tamaño pequeño, aproximadamente 6.7 kb. Es un ADN monocatenario, circular y de sentido positivo. Este virus infecta específicamente E. coli Bacterias a través de F pilus. Una vez que ingresa el ssDNA en la bacteria, sintetiza su cadena complementaria y se convierte en dsDNA o la forma replicativa (RF) de M13. La RF puede comportarse como un plásmido dentro del organismo huésped. El dsDNA se replica dentro de E. coli y produce ADNss con nuevos fagos. Estos nuevos fagos son liberados continuamente desde el E. coli Sin matar a la célula huésped. Sin embargo, la infección ralentiza el crecimiento de E Coli. El dsDNA puede extraerse de células bacterianas y usarse como vectores en la clonación de ADN. Se les conoce como vectores fagos M13. Pueden manipularse fácilmente y usarse de manera similar a los vectores de plásmidos..
La capacidad inherente de la infección de estos fagos M13 sirve como una buena calificación para ser utilizada como un vector en la clonación de genes. Al desarrollar M13 en un vector, se deben incorporar varios elementos en su genoma. Son, un gen para la proteína represora lac (lac I), la región proximal-operadora del lac Z Gen, un promotor lac y un sitio de clonación múltiple (polilinker). Cuando se utiliza dsDNA de M13 como vectores, puede tratarse como un vector plásmido. Sin embargo, el uso de ssDNA M13 tiene ventajas en la secuenciación del ADN y en la mutagénesis dirigida al sitio..
Dado que el vector fago M13 contiene un sitio de clonación múltiple en lacZ En la región, los vectores recombinados se pueden identificar fácilmente mediante la selección de colonias azul / blanca en placas de agar que contienen IPTG y X-Gal. Las placas azules producidas en las placas no contienen los fagos recombinados. Por lo tanto, los fagos con inserciones se pueden seleccionar para el propósito de clonación.
Figura 02: Bacteriófago M13
YAC vs M13 Phage Vector | |
YAC es un cromosoma diseñado genéticamente que tiene la capacidad de transportar un gran segmento de ADN extraño y replicarse dentro de las células de levadura.. | El vector fago M13 es un vector viral desarrollado por el bacteriófago M13 que se utiliza para insertar ADN extraño en E. coli. |
Propósito | |
Los YAC se diseñaron para clonar grandes fragmentos de ADN genómico en levaduras. | Los vectores fágicos M13 se utilizan para insertar ADN extraño en E. coli. |
Longitud de inserción | |
Los YAC pueden contener inserciones genómicas del tamaño de una megabase (1000 kb - 2000 kb). | El tamaño de las inserciones es de unos 1.500 bps.. |
Construcción | |
El ADN de YAC es difícil de purificar intacto y requiere una alta concentración para generar el sistema de vector YAC. | Se produce a través de la cadena de electrones fotosintética cíclica.. |
Estabilidad | |
YAC es inestable. | Los fagos M13 se pueden extraer fácilmente. |
tamaño | |
Las enzimas son moléculas más grandes.. | Los fagos M13 son estables que YAC. |
YAC es un sistema de vector construido artificialmente que utiliza una región específica del cromosoma de levadura para insertar grandes segmentos de material genético en las células de levadura. El vector fago M13 es un sistema vectorial derivado del bacteriófago M 13 que utiliza E. coli como organismo huésped. Esta es la principal diferencia entre YAC y M13 Phage Vector. Ambos son igualmente útiles en tecnología de ADN recombinante y clonación de genes..
Referencia:
1. "Vector". Genética-notas - Vector. N.p., n.d. Web. 16 de mayo de 2017. https://genetics-notes.wikispaces.com/Vector
2. "Cromosoma artificial de levadura". Wikipedia. Fundación Wikimedia, 21 de abril de 2017. Web. 16 de mayo de 2017. .
Imagen de cortesía:
1. "M13B" Por J3D3 - Trabajo propio (CC BY-SA 3.0) vía Commons Wikimedia