Diferencia entre la tripsinización caliente y fría

Diferencia Clave - Cálido vs Frío Tripsinización

La tripsinización en caliente y en frío son dos métodos utilizados en la desagregación enzimática de células en el cultivo de células animales. los diferencia clave entre la tripsinización cálida y fría, como lo sugieren los nombres, depende de la temperatura a la que se agrega la tripsina para la desagregación celular. La tripsinización caliente se lleva a cabo en condiciones de temperatura más alta (36.5 - 37 ⁰C) mientras que la tripsinización en frío tiene lugar en condiciones de baja temperatura.

Durante el proceso de cultivo de células primarias de células animales, se utilizan tres métodos principales que han demostrado ser exitosos. Los tres métodos incluyen la desagregación mecánica de las células, la desagregación enzimática de las células y la técnica de explante primario. La desagregación enzimática de las células que lleva al aislamiento de las células se realiza mediante la enzima degradante de la proteína tripsina. Por lo tanto, este proceso se conoce como tripsinización. La tripsinización se puede realizar bajo dos condiciones diferentes: la tripsinización en caliente y la tripsinización en frío. La tripsinización en caliente es el método para tratar las células con tripsina en condiciones cálidas a una temperatura de 36,5 a 37ºC. ⁰C. La tripsinización en frío es el proceso de tratamiento con tripsina que se realiza en condiciones más frías, preferiblemente en hielo, manteniendo temperaturas muy bajas..

CONTENIDO

1. Resumen y diferencia clave
2. ¿Qué es la tripsinización caliente?
3. ¿Qué es la tripsinización en frío?
4. Similitudes entre la tripsinización caliente y fría
5. Comparación lado a lado: tripsinización en frío frente a caliente en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la tripsinización caliente??

Se puede realizar una tripsinización para desagregar los componentes celulares con el fin de aislar las células para producir un cultivo celular primario. La tripsina es una enzima de degradación de proteínas, y la mezcla de enzimas utilizada en la tripsinización puede ser un extracto crudo o un producto purificado. Se dice que el extracto crudo es más eficiente en la lisis de proteínas y la desintegración celular ya que contiene otras enzimas degradantes..

La tripsinización en caliente es el método enzimático más comúnmente utilizado para la desagregación celular que tiene lugar en condiciones de temperaturas más altas. Antes del tratamiento por tripsinización, el tejido deseado se corta en trozos más pequeños. Facilita el proceso de fácil desagregación. El tejido cortado se lava luego en un medio especial conocido como el medio de sal basal de disección.

Una vez completada la etapa de lavado, las células se transforman en un matraz que contiene la enzima activa, que es tripsina. Como esta técnica implica un protocolo de tripsinización en caliente, la tripsina se coloca a una temperatura de alrededor de 37ºC. ⁰C durante unas cuatro horas.

Figura 01: tripsina

Los contenidos se mezclan y agitan utilizando métodos de centrifugación para facilitar el protocolo y acelerar el proceso de desagregación. Una vez que se alcanza el tiempo recomendado, las células pueden derivarse del sobrenadante. Las células derivadas del sobrenadante se incuban a una temperatura y tiempo particulares.

¿Qué es la tripsinización en frío??

La tripsinización en frío es el otro tipo de tripsinización que tiene lugar en condiciones de frío. En esta técnica, las células que se trocean y se lavan se colocan en viales sobre hielo y luego se empapan con tripsina. El período de remojo es mucho más largo, aproximadamente de 6 a 24 horas..

Una vez completado el procedimiento de remojo, la tripsina se retira del lisado celular y los trozos de tejido se incuban adicionalmente a 37ºC.⁰C durante unos 20 - 30 minutos. La desagregación de las células se realiza mediante un pipeteo repetido de la mezcla de tejido. Esto permitirá que las células se disocien de la membrana y lleguen al sobrenadante. Una vez que las células están en el sobrenadante, se incuban y se cultivan a una temperatura y un período de tiempo deseados..

El método de tripsinización en frío tiene varias ventajas.

Mayor rendimiento de células viables a medida que se minimiza el daño celular. El daño celular se minimiza al no usar pasos de centrifugación.
Método muy conveniente.
Menos laborioso.

La principal limitación del método de tripsinización en frío es que no se pueden usar grandes cantidades en una instancia.

¿Cuáles son las similitudes entre la tripsinización caliente y fría??

Los procesos de tripsinización en caliente y en frío utilizan la enzima tripsina para el desglose de las células..
Los procesos de tripsinización en caliente y en frío se utilizan en procedimientos de cultivo celular para el desglose de células..
En los procedimientos de tratamiento de tripsinización en caliente y en frío, las células se derivan del sobrenadante..

¿Cuál es la diferencia entre la tripsinización caliente y fría??

Trypsinization caliente vs frio
La tripsinización en caliente es el método para tratar las células con tripsina en condiciones cálidas a una temperatura de 36,5 a 37ºC. ⁰.	La tripsinización en frío es el proceso de tratamiento con tripsina que se realiza en condiciones más frías, preferiblemente en hielo manteniendo temperaturas muy bajas.
Protocolo
Las piezas de tejido cortadas se mantienen a 37ºC. ⁰C continuamente durante todo el procedimiento..	Las piezas de tejido cortadas se mantienen inicialmente a temperaturas de hielo y luego se mantienen a 37ºC. ⁰.
Temperatura
La tripsinización caliente ocurre a los 36.5 - 37. ⁰	La tripsinización en frío se produce a temperaturas muy frías..
Tiempo consumido
Menos tiempo requerido para todo el proceso (aproximadamente 4 horas) de tripsinización en caliente.	Se requiere más tiempo (alrededor de 6 a 24 horas) para la tripsinización en frío.
Rendimiento de células viables
Baja en cálida tripsinización..	Alta en tripsinización en frío..
Uso de la centrifugación
La centrifugación es necesaria para la desagregación de células en la tripsinización en caliente..	La centrifugación no es necesaria en la tripsinización en frío..
Cantidad de tejido inicial para tripsinización
Se puede utilizar una mayor cantidad de tejido en la tripsinización caliente..	Una pequeña cantidad de tejido se puede utilizar en la tripsinización en frío.
Daño Celular
Alto debido a la centrifugación en tripsinización caliente..	Menos debido a la tripsinización en frío..

Resumen - Cálido vs Frío Tripsinización

La tripsinización es el método de uso de la enzima tripsina degradadora de proteínas para la desagregación y preparación de cultivos celulares primarios durante el proceso de cultivo celular. Existen dos técnicas principales de tripsinización basadas en las temperaturas utilizadas durante el procedimiento. Son cálidos y fríos de tripsinización. La tripsinización caliente se realiza a 37ºC. ⁰C, mientras que la tripsinización en frío se lleva a cabo en condiciones de frío. Aunque la tripsinización en frío tarda más tiempo en completarse, se dice que tiene un mayor rendimiento de células viables. Esto se debe al hecho de que el daño celular se minimiza en la tripsinización en frío, ya que no utiliza pasos de centrifugación vigorosos. Esta es la diferencia entre la tripsinización cálida y fría..

Referencia:

1. "La tripsinización". La tripsinización: una visión general | Temas de ScienceDirect. Disponible aquí
2. “Cultura celular primaria: 3 técnicas (con diagrama)”. Discusión sobre biología, 16 de octubre de 2015. Disponible aquí

Imagen de cortesía:

1.'Trypsin active site'By Fdardel - Trabajo propio, (CC BY-SA 3.0) vía Commons Wikimedia

Biología Celular