Diferencia entre la PCR y la PCR en tiempo real

PCR vs PCR en tiempo real

La reacción en cadena de la PCR o de la polimerasa es un descubrimiento revolucionario en la biología molecular moderna, que fue desarrollado por primera vez por el químico Kary Mullis en 1983. Permite que una sola secuencia en un ADN complejo se amplifique para su análisis. La idea básica de la PCR es que dos cebadores, que son complementarios a las cadenas opuestas de una secuencia de ADN, están orientados uno hacia el otro; los cebadores producen cadenas complementarias, cada una de las cuales contiene el otro cebador. Por lo tanto, el resultado es una gran cantidad de una secuencia correspondiente al ADN que se encuentra entre los dos cebadores. La enzima ADN polimerasa se utiliza para extender los cebadores en la PCR. La ADN polimerasa es una enzima termoestable y tiene la capacidad de sobrevivir a altas temperaturas (94 a 95 ° C) utilizadas para la desnaturalización del ADN de plantilla..

La PCR implica tres pasos, a saber, repetidas rondas de desnaturalización, recocido de cebadores y síntesis de ADN. Se utiliza una máquina de termociclador para realizar esta reacción, de modo que se puede programar para cambiar las temperaturas de manera rápida y precisa. Las aplicaciones de la PCR son investigaciones criminales, huellas dactilares de ADN, detección de patógenos y análisis de ADN de especies humanas primitivas..

¿Qué es la PCR convencional??

Hay tres etapas principales de la PCR convencional, a saber: Etapa de amplificación de ADN, separación de PCR y detección de productos. La separación de los segmentos de ADN se realiza típicamente mediante electroforesis en gel de agarosa. Los productos se tiñen luego con bromuro de etheiduim. Finalmente, la detección se logra mediante la visualización de bandas en geles bajo luz UV. Por lo tanto, los resultados finales de la PCR convencional no se expresan como números. Normalmente, la PCR convencional solo es capaz de detectar un solo parámetro.

¿Qué es la PCR en tiempo real??

La PCR en tiempo real puede detectar la amplificación de productos, ya que los productos se sintetizan. Con el desarrollo de la tecnología, la PCR se ha convertido en una técnica muy popular, especialmente para la detección e identificación de bacterias en los alimentos. La PCR en tiempo real utiliza un sistema de tinte fluorescente y un termociclador equipado con capacidad de detección fluorescente.

¿Cuál es la diferencia entre la PCR convencional y la PCR en tiempo real??

• La PCR convencional consume más tiempo, ya que utiliza electroforesis en gel para analizar los productos de PCR amplificados. En contraste, la PCR en tiempo real consume menos tiempo ya que puede detectar amplificaciones durante las primeras fases de la reacción.

• La PCR en tiempo real recopila datos en la fase de crecimiento exponencial de la PCR, mientras que la PCR tradicional recopila datos en el punto final de la reacción.

• Los resultados del punto final de la PCR convencional pueden no ser muy precisos, pero los resultados de la PCR en tiempo real son muy precisos.

• La PCR en tiempo real es más sensible que la PCR convencional.

• La PCR convencional tiene una resolución muy pobre, mientras que la PCR en tiempo real puede detectar muy pocos cambios debido a la alta resolución.

• La detección de punto final de la PCR convencional tiene un rango dinámico corto, mientras que la detección de la PCR en tiempo real tiene un rango dinámico amplio.

• A diferencia de la PCR convencional, las técnicas de detección automatizadas se encuentran en la PCR en tiempo real.

• La PCR convencional es altamente sofisticada y requiere más trabajo que la PCR en tiempo real.

• A diferencia de la PCR en tiempo real, la PCR convencional no puede discriminar entre bacterias vivas y muertas.

• La PCR en tiempo real utiliza un sistema de tinte fluorescente para detectar los productos, mientras que la PCR convencional utiliza bromuro de etidio y luz UV para visualizar las bandas en el medio de gel de agarosa.